珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用制造技术

本发明专利技术涉及天然产物有效成分提取技术领域，特别涉及珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用。通过采用酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉复合菌（酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉按2:3:1的比例混合），充分发挥各个菌种的作用，真菌、细菌生长所产生的酶对白首乌进行分解，从而释放出白首乌组织中的活性成分，同时真菌产生的酶还能分解白首乌粗多糖，降低白首乌粗多糖的分子量，使得发酵后的白首乌利于后续的纯化分离，因此利用本发明专利技术提取的白首乌多糖具有提取物纯度高，杂质易分离的特点，而且得率、蛋白质清除率和脱色率均较高。蛋白质清除率和脱色率均较高。蛋白质清除率和脱色率均较高。

【技术实现步骤摘要】
珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用


[0001]本专利技术涉及天然产物有效成分提取
，特别涉及珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用。

技术介绍

[0002]白首乌来源于萝藦科鹅绒藤属植物戟叶牛皮消Cynanchum bungei Decne.的干燥块根，具有补肝肾、强筋骨、益精血、乌须发的功效，是一种传统的滋补类药材。古籍记载，白首乌用于晚唐，盛行于早明，沿用至今。因其补肾益肝、乌发生发、养血益精、抗衰老之功效，被历代名家视为摄生防老珍品。白首乌含有 C21甾苷类、多糖类、苯乙酮类等活性成分,这些成分与其抗肿瘤、保肝护肝、抗氧化 以及免疫调节等药理活性密切相关。
[0003]白首乌多用于保健品行业，针对白首乌活性成分的研究报道主要为C21甾苷类、苯乙酮类等，但对白首乌多糖却报道甚少。多糖作为生物体内重要的活性物质，在控制机体细胞生长、分裂和维持生命个体的正常生理机能等方面具有重要作用。白首乌多糖具有降血脂功能，对酒精性肝损伤有保护作用。
[0004]白首乌多糖提取以传统的水提醇沉法为主，随着研究的深入，现多在水提醇沉的基础上多辅以超声和微波技术，通过优化料水比、提取温度及时间来提高白首乌多糖提取率，但此类方法提取周期长，提取量少且水提过程中温度过高会破坏多糖的结构。

技术实现思路

[0005]针对现阶段白首乌多糖提取存在的问题，本专利技术提供一种新的白首乌多糖的提取方法，通过采用酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉复合菌，充分发挥各个菌种的作用，真菌、细菌生长所产生的酶对白首乌进行分解，从而释放出白首乌组织中的活性成分，同时真菌产生的酶还能分解白首乌粗多糖，降低白首乌粗多糖的分子量，使得发酵后的白首乌利于后续的纯化分离，因此利用本专利技术提取的白首乌多糖具有提取物纯度高，杂质易分离的特点，而且得率、蛋白质清除率和脱色率均较高。
[0006]本专利技术的技术方案如下：珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用，采用酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉混合发酵白首乌，发酵液纯化脱色后得到白首乌多糖。
[0007]优选地，所述酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉按2: 3: 1的比例混合。
[0008]优选地，具体过程包括以下步骤：（1）在无菌条件下，取适量液体培养基，将酵母菌、珊瑚拟青霉及枯草芽孢杆菌按比例接种于液体培养基中，摇床培养后得到含纤维素酶、淀粉酶的复合菌培养液；（2）将新鲜白首乌切片，置于烘箱烘干，用高速粉碎机粉碎，得到白首乌粉末；（3）将步骤（2）的白首乌粉末加入水中，用胶体磨处理后加入到高压均质机中均质处理，离心喷雾干燥，灭菌后得到白首乌细粉；（4）将步骤（3）制得的均质液投入步骤（1）制备的复合菌培养液中，充分搅拌，供氧
发酵，继续培养得到发酵液；离心获得上清液；（5）步骤（4）的上清液加脱色活性炭，静置吸附，真空抽滤去渣，得滤液；（6）步骤（5）的滤液中加入Sevage试剂，混合后充分振荡，离心，取上清液；（7）将步骤（6）的上清液与乙醇混合，充分搅拌至产生沉淀，静置，离心后获得沉淀物，乙醇洗涤，真空干燥后得到白首乌多糖。
[0009]优选地，步骤（1）所述的液体培养基，按照质量百分比为：羧甲基纤维素20%，葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨0.1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，其余为水；酵母菌的体积为培养基体积的1
‑
10%；摇床培养的温度为26
‑
30℃，转速160r/min，摇床培养时间为12h。
[0010]优选地，所述步骤（3）中，白首乌粉末与水的重量比为1:7；均质处理过程中，压力为25Mpa，处理时间为10
‑
20min；喷雾干燥的温度为150
‑
200℃。
[0011]优选地，所述步骤（4）中，在发酵罐中加入均质液并注入步骤（1）制备的复合菌培养液，量取步骤（2）的白首乌粉末质量5
‑
10倍的复合菌培养液加入发酵罐中，加入KH2PO4和Na2HPO4缓冲溶液调节发酵罐中的料液pH至5.5
‑
6.5，充分搅拌，发酵温度为25
‑
35℃，供氧发酵，氧浓度控制在0.020
‑
0.040mol/L，继续培养24
‑
72h得到发酵液。
[0012]优选地，所述步骤（5）中，向上清液中加入上清液质量5
‑
8%的脱色活性炭，静置吸附1h以上。
[0013]优选地，所述步骤（6）中，将滤液与Sevage试剂按照体积比4
‑
6:1进行混合，混合后充分振荡，离心，取上清液。
[0014]优选地，所述步骤（7）中，将步骤（6）获得的上清液与质量浓度为95%的乙醇按质量比1:1
‑
3进行混合，充分搅拌至产生沉淀，静置12
‑
48h，离心，获得沉淀物，将沉淀物用乙醇洗涤3次，真空干燥，得到白首乌多糖。
[0015]菌种保藏信息保藏时间：2017年6月1日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：CGMCC No . 14129；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101；分类命名：Penicilliopsis clavariaeformis。
[0016]本专利技术的有益效果本专利技术主要通过真菌及细菌发酵白首乌，再通过分离纯化得到白首乌多糖，发酵过程中真菌、细菌生长所产生的酶对白首乌进行分解，从而释放出白首乌组织中的活性成分，同时真菌产生的酶还能分解白首乌粗多糖，降低白首乌粗多糖的分子量，使得发酵后的白首乌利于后续的纯化分离，因此利用本专利技术提取的白首乌多糖具有提取物纯度高，杂质易分离的特点，而且得率、蛋白质清除率和脱色率均较高。
[0017]本专利技术在发酵之前对白首乌粉末进行了高压均匀处理，该操作有利于白首乌多糖从白首乌中分离出来，能进一步提高本专利技术的得率。
[0018]珊瑚拟霉菌菌丝体中的多糖具有显著地还原力和清除自由基的能力，能够显著提高抗氧化酶活性；促进其他菌类成长的同时，提升白首乌多糖的得率。
附图说明
[0019]图1为不同体积复合菌对白首乌多糖提取率的影响图；图2为不同体积复合菌培养液与粉末配比对白首乌多糖提取率的影响图；图3为供氧发酵时不同氧浓度对白首乌多糖提取率的影响图。
具体实施方式
[0020]下面将结合具体实施例来详细说明本专利技术，在此本专利技术的示意性实施例及其说明用来解释本专利技术，但并不作为对本专利技术的限定。
[0021]实施例1珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用，包括以下步骤：（1）在无菌条件下，取适量液体培养基，液体培养基的重量百分比组成为羧甲基纤维素20%，葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨0.1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，其余为水，酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉按2: 3: 1的比例混合接种于培养基中，酵母菌、珊瑚拟青霉及枯草芽孢杆菌的总体积为培养基体积的5%，摇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.珊瑚拟青霉在白首乌多糖提取上的应用，其特征在于，采用酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉混合发酵白首乌，发酵液纯化脱色后得到白首乌多糖。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酵母菌、枯草芽孢杆菌与珊瑚拟青霉按2: 3: 1的比例混合。3.根据权利要求1所述得应用，其特征在于，具体过程包括以下步骤：（1）在无菌条件下，取适量液体培养基，将酵母菌、珊瑚拟青霉及枯草芽孢杆菌按比例接种于液体培养基中，摇床培养后得到含纤维素酶、淀粉酶的复合菌培养液；（2）将新鲜白首乌切片，置于烘箱烘干，用高速粉碎机粉碎，得到白首乌粉末；（3）将步骤（2）的白首乌粉末加入水中，用胶体磨处理后加入到高压均质机中均质处理；（4）将步骤（3）制得的均质液投入步骤（1）制备的复合菌培养液中，充分搅拌，供氧发酵，继续培养得到发酵液；离心获得上清液；（5）步骤（4）的上清液加脱色活性炭，静置吸附，真空抽滤去渣，得滤液；（6）步骤（5）的滤液中加入Sevage试剂，混合后充分振荡，离心，取上清液；（7）将步骤（6）的上清液与乙醇混合，充分搅拌至产生沉淀，静置，离心后获得沉淀物，乙醇洗涤，真空干燥后得到白首乌多糖。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（1）所述的液体培养基，按照质量百分比为：羧甲基纤维素20%，葡萄糖2%，蔗糖2%，蛋白胨0.1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，其余为水；酵母菌的体积为培养基体积的1
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10%；摇床培养的温度为26
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30℃，转速160r/min，摇床培养时间为12h。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王焜佳，崔立娟，李欣培，张珂璠，徐凌川，王厚伟，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：