一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物分析技术领域，提供了一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，包括彼此独立的试剂1和试剂2，试剂1由稳定剂和防腐剂置于pH为6.5～7.5的缓冲液中组成；试剂2由牛血清白蛋白、表面活性剂、防腐剂和包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒置于pH为6～8的缓冲液中组成。本发明专利技术的试剂盒采用胶乳免疫比浊法为检测原理测定血清抗酪氨酸磷酸酶抗体，与目前临床使用试剂盒相比，特异性、灵敏度、准确性一致，且本发明专利技术的试剂盒适用于各种生化分析仪上大批量测定，不需要昂贵的检测仪器，检测时间短、操作方便、检测成本低，且无放射性污染。且无放射性污染。

【技术实现步骤摘要】
一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物分析
，尤其涉及一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒。

技术介绍

[0002]1型糖尿病患者在发病前体内已存在多种自身抗体如酪氨酸磷酸酶抗体、酪氨酸磷酸酶抗体和胰岛素自身抗体等，胰岛β细胞和免疫损害往往需要经历数年时间，从而有一个较长的临床前驱期。Anti
‑
IA
‑
2在糖尿病前期和1型糖尿病患者中的阳性率为50％
‑
75％，年轻初发患者中的阳性率更高，并与初发病进展的速度有关。儿童Anti
‑
IA
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2阳性提示很快发生临床症状明显的1型糖尿病。
[0003]酪氨酸磷酸酶(IA
‑
2)是1型糖尿病的一个主要靶抗原，且特异度高。检测IA
‑
2自身抗体对于1型糖尿病的诊断、鉴别诊断、治疗监控和预测具有重要的临床意义。目前国际上建立的方法有免疫荧光法、放射免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、时间分辩荧光免疫分析法和放射配体检测法。免疫荧光法，操作较复杂，需要昂贵的荧光显微镜，只能进行定性检测，分析结果的客观性不足；ELISA等方法因在包被过程中遮蔽了抗原表位或抗体不能充分与其反应，致使灵敏度降低。多次国际标准化评估显示，放射配体检测法具有高灵敏度和特异度，是检测IA
‑
2自身抗体最有效的方法。然而，放射配体检测IA
‑
2自身抗体影响因素众多，只有在严格的质量控制情况下才能得到理想的结果，还存在放射性污染的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少克服上述现有技术的缺点与不足其中之一，提供一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒。本专利技术目的基于以下技术方案实现：
[0005]一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，包括彼此独立的试剂1和试剂2，其中：
[0006]所述试剂1由稳定剂和防腐剂置于pH为6.5～7.5的缓冲液中组成；
[0007]所述试剂2由牛血清白蛋白、表面活性剂、防腐剂和包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒置于pH为6～8的缓冲液中组成。
[0008]优选地，所述稳定剂包括氯化钠、和/或氯化钾。
[0009]优选地，所述防腐剂包括叠氮钠、Procline300、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠中的一种或多种。
[0010]优选地，所述缓冲液包括柠檬酸钠、2
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吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS缓冲液。
[0011]优选地，所述表面活性剂包括吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、曲拉通X
‑
100中的一种或多种。
[0012]优选地，所述试剂1包括柠檬酸钠50～150mmol/L，氯化钠0.05～0.3mol/L，防腐剂0.01～0.06wt％；
[0013]所述试剂2包括柠檬酸钠50～150mmol/L，牛血清白蛋白0.5～2wt％，吐温20 0.5～2wt％，防腐剂0.01～0.06wt％，包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒0.2～3wt％。
[0014]优选地，所述试剂1包括柠檬酸钠100mmol/L，氯化钠0.15mol/L，防腐剂0.03wt％；
[0015]所述试剂2包括柠檬酸钠100mmol/L，牛血清白蛋白1wt％，吐温20 1wt％，防腐剂0.03wt％，包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒1wt％。
[0016]优选地，本专利技术提供的一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，还包括校准品，所述校准品包含50wt％人血清、25～100mmol/L缓冲剂、2～10wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化钠、0.01～0.06wt％防腐剂、靶值浓度范围为450～600IU/mL的抗酪氨酸磷酸酶抗体。
[0017]优选地，本专利技术提供的一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，还包括质控品，所述质控品包含50wt％人血清、25～100mmol/L缓冲剂、2～10wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化钠、0.01～0.06wt％防腐剂、抗酪氨酸磷酸酶抗体，所述抗酪氨酸磷酸酶抗体的水平1目标浓度范围为3～100IU/mL，所述抗酪氨酸磷酸酶抗体的水平2目标浓度范围为100～300IU/mL。
[0018]优选地，所述校准品和/或质控品的性状为冻干粉。
[0019]优选地，所述缓冲剂的pH为6.0～8.0。
[0020]优选地，所述试剂1和2按照体积比1.5～5：1进行免疫凝集反应。
[0021]本专利技术可至少取得如下有益效果其中之一：
[0022]本专利技术的试剂盒采用胶乳免疫比浊法为检测原理测定血清抗酪氨酸磷酸酶抗体，在反应体系中，样本中的抗酪氨酸磷酸酶抗体和包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，可根据浊度吸光度变化计算样本中的抗酪氨酸磷酸酶的活性。与目前临床使用试剂盒相比，特异性、灵敏度、准确性一致，且本专利技术的试剂盒适用于各种生化分析仪上大批量测定，不需要昂贵的检测仪器，检测时间短、操作方便、检测成本低、无放射性污染，适合临床推广使用。
具体实施方式
[0023]下面将对本专利技术的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]检验原理：
[0025]在反应体系中，样本中的抗酪氨酸磷酸酶抗体和包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，可根据浊度吸光度变化计算样本中的抗酪氨酸磷酸酶的活性。
[0026]实施例1试剂盒的制备
[0027]一.试剂1和试剂2
[0028]1.试剂主要原料
[0029]抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)的主要原料是包被有酪氨酸磷酸酶抗原的胶乳颗粒，经过对国内外厂家的调研和筛选，选择了两个厂家的产品，分别为北京百尚利德和北京华元山水生物科技有限公司。
[0030]缓冲液及pH值：
[0031]缓冲体系pH值
Tris
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HCl(三羟甲基氨基甲烷)7.5PBS(NaH2PO4·
Na2HPO4·
12H2O)7.5柠檬酸钠6.5HEPES(4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸)7.5MES(2
‑
吗啉乙磺酸)6.5
[0032]2.实验仪器及条件
[0033]全自动生化分析仪(型号Olympus AU400)
[0034]检验方法：终点法检验温度：37℃
[0035]检验波长：600nm比色杯光径：1cm
[0036]以水作为空白对照
[0037]3.实验方法
[0038]每种缓冲液各取60mL，作为试剂1使用，另外，每本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂1和试剂2，其中：所述试剂1由稳定剂和防腐剂置于pH为6.5～7.5的缓冲液中组成；所述试剂2由牛血清白蛋白、表面活性剂、防腐剂和包被有酪氨酸磷酸酶抗原的胶乳颗粒置于pH为6～8的缓冲液中组成。2.根据权利要求1所述的一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括氯化钠、和/或氯化钾；所述防腐剂包括叠氮钠、Procline300、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括柠檬酸钠、2
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吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS缓冲液；所述表面活性剂包括吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、曲拉通X
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100中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括柠檬酸钠50～150mmol/L，氯化钠0.05～0.3mol/L，防腐剂0.01～0.06wt％；所述试剂2包括柠檬酸钠50～150mmol/L，牛血清白蛋白0.5～2wt％，吐温20 0.5～2wt％，防腐剂0.01～0.06wt％，包被有酪氨酸磷酸酶抗原胶乳颗粒0.2～3wt％。5.根据权利要求4所述的一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括柠檬酸钠1...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭勇，郝立颖，曹培杰，周晶，邢冬梅，
申请(专利权)人：北京世纪沃德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：