一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法技术

本发明专利技术涉及细菌DNA提取技术领域，且公开了一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，包括以下工作步骤：取样与保存；第二步：粪便DNA提取与纯化；第三步：DNA样品质量检测；第四步：PCR扩增；第五步：PCR产物的纯化及序列测定；第六步：粪便DNA模板中背景DNA的检测，采集新鲜的大熊猫粪便和大熊猫粪便表面富含黏膜部分，使用2倍体积的100％乙醇保存。本发明专利技术中，由于在抽提获得了较高浓度的目标动物DNA的基础上,模板中抑制物被有效去除,而未对PCR产生影响，可以有效去除PCR反应中的酶抑制物成分，适用于不同物种粪便中微生物DNA的提取，达到快速高效提取动物粪便中微生物DNA的效果。快速高效提取动物粪便中微生物DNA的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法


[0001]本专利技术涉及细菌DNA提取
，尤其涉及一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法。

技术介绍

[0002]动物肠道正常菌群中的菌类，因其能产生乳酸，所以归属于乳酸菌类。屎肠球菌是一种益生菌，对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用。
[0003]由于动物粪便复杂，不仅含有肠道微生物、未消化的食物、消化酶、黏液、胆盐、胆红素等，且食草动物粪便内还存在大量植物多糖等，常规的抽提方法得到的粪便DNA中常伴有共纯化的DNA聚合酶抑制物,对PCR反应有强烈的抑制作用。
[0004]目前国际上一般使用试剂盒抽提粪便DNA，但是价格不菲，因而，分子粪便学的发展需要一种经济而实用的试验方法，对目标DNA成功地进行了PCR扩增和序列测定，为此，我们提出一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术主要是解决上述现有技术所存在的技术问题，提供一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法。
[0006]为了实现上述目的，本专本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，包括以下工作步骤：第一步：取样与保存；第二步：粪便DNA提取与纯化；第三步：DNA样品质量检测；第四步：PCR扩增；第五步：PCR产物的纯化及序列测定；第六步：粪便DNA模板中背景DNA的检测。2.根据权利要求1所述的一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，其特征在于：所述第一步，采集新鲜的大熊猫粪便和大熊猫粪便表面富含黏膜部分，使用2倍体积的100％乙醇保存。3.根据权利要求1所述的一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，其特征在于：所述第二步，提取大熊猫粪便中的DNA，制成DNA溶液并保存。4.根据权利要求1所述的一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，其特征在于：所述第三步，吸出适量第二步中所得DNA溶液,用NanoDrop检测DNA浓度,较纯的DNA样品A260/A280比值在1.8左右，低于1.5说明样品不纯,含蛋白质较多。5.根据权利要求1所述的一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，其特征在于：所述第四步，使用抽提到的DNA模板﹐对大熊猫线粒体基因组不同片断进行扩增，扩增体系:10
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Buffer5ul，4uldNTP(10mmol)，4HlMgCl2(20mmol)，Taq酶1.25ul，引物各1ul，BSA(1mg/ml)5u1，1
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5u1模板DNA，使用超纯水将反应体系补至50ul。6.根据权利要求5所述的一种快速高效提取大熊猫粪便微生物DNA的方法，其特征在于：所述第四步，循环条件为：95℃预变性4min,95℃变性30s,54
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【专利技术属性】
技术研发人员：李锋，徐忠鲜，张泽均，胡杰，洪明生，杨艳，周琳，
申请(专利权)人：西华师范大学，
类型：发明
国别省市：