一种mRNA的分离纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种mRNA的分离纯化方法，所述mRNA的分离纯化方法包括将待分离纯化的mRNA原料经过两次疏水层析进行分离纯化。利用本发明专利技术方法得到的mRNA回收率高，纯度高；避免使用价格昂贵的层析介质，成本相对较低；操作简单并且能在室温下进行操作，并且无需有毒试剂，易于放大到工业化规模生产。总之，本发明专利技术提供了一种简便、成本低、易于放大的分离纯化获得高收率、高纯度的mRNA的方法，具有很好的实际应用价值。际应用价值。际应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种mRNA的分离纯化方法


[0001]本专利技术属于本专利技术属于核糖核酸分离纯化
，涉及一种mRNA的分离纯化方法。

技术介绍

[0002]核糖核酸(Ribonucleic acid，RNA)在生物学、医学和纳米技术等领域中有着广泛的应用。其中，信使RNA(Messenger RNA，mRNA)在蛋白质的合成中主要作为编码遗传信息的载体而发挥作用，天然mRNA具有单链结构，由5`端结合的7
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甲基鸟苷残基(5`
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cap)和3`端poly A尾组成。5`端的7
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甲基鸟苷帽子结构以及3`端的poly A尾巴不仅对于mRNA的结构起着稳定作用而且对于mRNA在细胞质中的翻译效率也有着很大的影响。
[0003]基于mRNA的疗法近年来受到广泛关注，因为mRNA只需要到达细胞的细胞质进行翻译便可以产生目标蛋白，极大提高了治疗效率，同时mRNA不会插入到宿主细胞的基因组中，极大程度地降低了插入所产生的突变风险，提高了mRNA治疗的安全性。除此之外用于治疗的mRNA只产生瞬时翻译并通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种mRNA的分离纯化方法，其特征在于，所述mRNA的分离纯化方法包括将待分离纯化的mRNA原料经过两次疏水层析进行分离纯化。2.如权利要求1所述的mRNA的分离纯化方法，其特征在于，所述待分离纯化的mRNA原料由DNA转录得到，所述转录后还任选地包括加帽和/或加尾。3.如权利要求1或2所述的mRNA的分离纯化方法，其特征在于，所述mRNA的分离纯化方法包括如下步骤：(1)将待分离纯化的mRNA原料进样至疏水层析柱中，用平衡缓冲液冲洗疏水层析柱，收集穿透组分，吸附组分弃去或重复利用；(2)将穿透组分进样至疏水层析柱中，用平衡缓冲液冲洗疏水层析柱，后用流动相进行洗脱，根据260nm处的紫外吸收信号，收集mRNA组分。4.如权利要求3所述的mRNA的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)所述疏水层析柱中层析介质的配基各自独立地包括丁基、苯基、辛基或丁基硫中的任意一种；优选地，步骤(1)中疏水层析柱所用配基为丁基，步骤(2)中疏水层析柱所用配基为丁基或辛基。5.如权利要求3或4所述的mRNA的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)所述进样前还包括利用平衡缓冲液平衡疏水层析柱。6.如权利要求3
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5中任一项所述的mRNA的分离纯化方法，其特征在于，所述洗脱中，流动相包括A相和B相，A相为平衡缓冲液，B相为洗脱液。7.如权利要求3
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6中任一项所述的mRNA的分离纯化方法，其特征在于，所述洗脱的方式包括梯度洗脱；优选地，所述梯度洗脱的方式包括线性梯度洗脱或阶梯梯度洗脱。8.如权利要求3
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7中任一项所述的mRNA的分离纯化方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏志国，李正军，张松平，冯雪，林旋，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：