桑叶脂质体提取制备方法、制品及在核酸递送中的应用技术

本发明专利技术涉及一种桑叶脂质体提取制备方法、制品及在核酸递送中的应用,方法包括以下步骤：制备桑叶萃取水溶液，溶于有机溶剂，混匀得到有机相，加入混合溶液，混匀得到混合体系，离心处理后对下层有机相中，加入设定量的KCl溶液，混匀后冷冻离心处理，溶液的下层有机相加入设定量的PF127，混匀后将有机相放入容器，在设定温度下旋蒸5

【技术实现步骤摘要】
桑叶脂质体提取制备方法、制品及在核酸递送中的应用


[0001]本专利技术涉及纳米药物载体与肿瘤靶向
，更具体地说，涉及一种桑叶脂质体提取制备方法、制品及在核酸递送中的应用。

技术介绍

[0002]脂质体是由磷脂等两亲性分子构建的双层囊泡，成为局部药物递送的有前途的纳米载体之一；脂质纳米颗粒载体是以纳米颗粒材料作为药物载体，将药物分子溶解或包裹于脂质分子的磷脂双分子层内部或是夹层，或者是通过吸附、附着于纳米粒子表面的新型纳米药物递送系统。脂质纳米药物不仅能够改善机体对药物吸收、改变药物体内过程，而且还具有药物缓释、控释、提高药物稳定性、增强疗效降低毒副作用等方面的优越性。现已广泛应用于基因药物、抗肿瘤药、蛋白质和多肽等药物的载体系统。现已有脂质体、脂质纳米药物、胶束等体系供临床使用；
[0003]植物来源的纳米结构和纳米颗粒在许多学科得到应用如保健、食品、饲料、化妆品、生物医学、能源科学、药物基因传递、环境健康等领域。植物中含有各种各样的囊泡，而研究发现它们均存在以下特点：(1)生物相容性好；(2) 对所载药物有广泛的重应性。同一个脂质体中可以同时包载亲水和疏水性药物；(3)安全性较高。磷脂本身是细胞膜成分，因此纳米脂质体注入体内无毒，生物利用度高，不引起免疫反应；(4)可以保护所载药物，防止体液对药物的稀释和被体内酶的分解破坏；(5)具有极强靶向性。因此植物纳米脂质体是一类很有发展前途的纳米材料。这些可食性植物来源囊泡每天在与人们的肠道接触。而且这些植物囊泡还参与健康受试者的肠道组织更新过程，调节肠道微生物群，并且对炎症性疾病(如结肠炎，肝脂肪变性)具有重要的生物学功能。此外，研究数据表明植物来源的纳米囊泡是治疗剂(如siRNA，抗癌药)或者难溶性天然化合物(如姜黄素，喜树碱)递送的极佳载体，比如，它可以作为抗肿瘤、抗菌、抗凝药物、类风湿性关节炎治疗药物以及经皮和粘膜给药系统药物载体。抗肿瘤药物载体作为研究最多、最有价值的应用载体，能够缓释抗肿瘤药物，延长药物在肿瘤内的存留时间，减慢肿瘤的生长，提高疗效，减少给药剂量和毒性反应。比如，现有研究发现纳米脂质体能有效的将p53基因转导入鼻咽癌细胞中，并抑制肿瘤细胞生长，诱发调亡。甘露聚糖修饰的靶向纳米脂质体对小鼠肺癌有一定疗效；鬼臼毒素纳米脂质体比鬼臼毒素混悬液抗肝癌效果好等等。从生姜、胡萝卜、葡萄、葡萄柚、柠檬、苹果、西蓝花等中分离并鉴定了可食性植物来源的纳米颗粒，这些纳米颗粒在大小和结构上与哺乳动物衍生的外泌体相似。它们含有蛋白质、脂质、miRNA，可被肠道巨噬细胞和干细胞所吸收，而达到对相应疾病的治疗；
[0004]天然植物脂质中含有一些天然靶向分子如半乳糖、磷脂酰丝氨酸等可以实现对细胞的天然靶向性，脂质作为药物载体具有良好的生物相容性和生物降解性等生物医学方面的性能，已经被FDA批准可应用于临床医学；目前，该类天然植物脂质制品还有待进一步开发。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种桑叶脂质体提取制备方法，提供了一种桑叶脂质体制品及一种桑叶脂质体在核酸递送中的应用。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]构造一种桑叶脂质体提取制备方法，包括以下步骤：
[0008]第一步：制备或取桑叶萃取水溶液；
[0009]第二步：第一步中得到的桑叶萃取水溶液溶于有机溶剂，混匀得到有机相；
[0010]第三步：将第二步中得到的有机相加入混合溶液，混匀得到混合体系；
[0011]第四步：将第三步中得到的混合体系离心处理；
[0012]第五步：将第四步中得到的溶液的下层有机相中，加入设定量的KCl溶液，混匀得到混合体系；
[0013]第六步：将第五步得到的混合体系冷冻离心处理；
[0014]第七步：将第六步中的溶液的下层有机相加入设定量的PF127，混匀后将有机相放入容器，在设定温度下旋蒸5
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10min，取未蒸发部分溶解在设定量的 HEPES缓冲液中，得到脂质体；
[0015]或者将第六步中的溶液的下层有机相加入容器，在设定温度下旋蒸 5
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10min，取未蒸发部分加入到设定量的PF127与HEPES缓冲液的混合溶液中，通过超声溶解脂质成分，得到脂质体。
[0016]本专利技术所述的桑叶脂质体提取制备方法，其中，所述第七步中，加入PF127 的量与桑叶萃取水溶液中的蛋白浓度存在关系：
[0017]桑叶萃取水溶液蛋白浓度*桑叶萃取水溶液体积/PF127的量＝ (80
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120):5。
[0018]本专利技术所述的桑叶脂质体提取制备方法，其中，所述第一步中，桑叶萃取水溶液制备包括以下步骤：
[0019]选用设定量桑叶溶于设定量的PBS缓冲液中，浸泡设定时间后，放入粉碎机里面榨汁粉碎，取上清液离心处理后，取上清液为桑叶萃取水溶液。
[0020]本专利技术所述的桑叶脂质体提取制备方法，其中，所述第二步中的有机溶剂为设定体积的甲醇和二氯甲烷的混合溶液。
[0021]本专利技术所述的桑叶脂质体提取制备方法，其中，所述第三步中的混合溶液由设定体积的二氯甲烷和去离子水混匀制成。
[0022]一种桑叶脂质体制品，其中，所述桑叶脂质体制品根据上述的桑叶脂质体提取制备方法制成。
[0023]一种桑叶脂质体在核酸递送中的应用。
[0024]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的桑叶脂质体，其具有均一的粒径、良好的生物相容性、可降解性以及粘膜穿透能力，同时口服后，可提高纳米药物在胃肠道中的稳定性及在病灶部位的聚集，提高纳米药物在炎症性肠病及癌症部位的治疗效果。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将结合附图及实施例对本专利技术作进一步说明，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的部分实施例，对于本领域
普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图：
[0026]图1是本专利技术较佳实施例的桑叶脂质体提取制备方法流程图；
[0027]图2是五种不同Pluronic表面活性剂的筛选和稳定性分析示意图；
[0028]图3是制备成功的Pluronic F127修饰的桑叶脂质体的动态光散射粒径、 Zeta电位和PDI分布测试结果示意图；
[0029]图4是制备成功的无Pluronic F127修饰的桑叶脂质体的成分分析示意图；
[0030]图5是制备成功的Pluronic F127修饰的桑叶脂质体的生物相容性评价示意图；
[0031]图6是制备成功的Pluronic F127修饰的桑叶脂质体与Lipo6000的转染效率比较示意图。
具体实施方式
[0032]为了使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的部分实施例，而不是全部实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种桑叶脂质体提取制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：制备或取桑叶萃取水溶液；第二步：第一步中得到的桑叶萃取水溶液溶于有机溶剂，混匀得到有机相；第三步：将第二步中得到的有机相加入混合溶液，混匀得到混合体系；第四步：将第三步中得到的混合体系离心处理；第五步：将第四步中得到的溶液的下层有机相中，加入设定量的KCl溶液，混匀得到混合体系；第六步：将第五步得到的混合体系冷冻离心处理；第七步：将第六步中的溶液的下层有机相加入设定量的PF127，混匀后将有机相放入容器，在设定温度下旋蒸5
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10min，取未蒸发部分溶解在设定量的HEPES缓冲液中，得到脂质体；或者将第六步中的溶液的下层有机相加入容器，在设定温度下旋蒸5
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10min，取未蒸发部分加入到设定量的PF127与HEPES缓冲液的混合溶液中，通过超声溶解脂质成分，得到脂质体。2.根据权利要求1所述的桑叶脂质体提取制备方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖波，马灵莉，曹银贵，段炼，刘祖兰，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：