唾液中检测肝癌的标志物及其试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用，并根据该应用建立诊断受试者是否属于肝癌或非肝癌的检测试剂或试剂盒。唾液中AFP和ORM1联合筛查肝癌的效能大于血液中AFP单独筛查的效能，能更准确的判断受试者是否为肝癌的疾病风险，且唾液检测为无创检测，受试者更容易接受，适用于长期的筛查和监测，以及早发现早治疗，以免耽误病情，提高患者生存率。提高患者生存率。提高患者生存率。

【技术实现步骤摘要】
唾液中检测肝癌的标志物及其试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，涉及唾液中ORM1和AFP联合作为检测肝癌的标志物的应用及其试剂盒。

技术介绍

[0002]肝癌在全球发病率排名第六，在男性中排名第五，女性中第九，病死率排名第三。肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见的肝癌病理类型，占90％。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染是HCC最重要的危险因素。肝癌的发病率在过去十年中有所下降，但死亡率仍然很高。与晚期肝癌相比，早期肝癌的5年生存率通过有效治疗可大大提高，早期诊断对改善肝癌预后尤为重要。早期筛查和监测可作为影响肝癌预后的独立因素。目前常用B超和血清甲胎蛋白进行肝癌的筛查和检测。B超检测需要禁食至少8小时，检测的准确性受到肝脏特征(如肝脏质地异常)、患者特征(如肥胖)、操作者技术(如超声质量和经验)等条件的限制。
[0003]目前，有肝癌危险因素的人每3
‑
6个月进行一次肝癌筛查，由于缺乏特异的临床症状和有效的筛查方式，高比例的HCC患者被发现时已进入晚期。但肝癌是一种进展迅速的癌症，确诊后的一年存活率仅为36％。因此，探索一种既经济又方便，对患者和医务人员都适用的肝癌筛查方法就显得尤为重要。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种唾液中ORM1和AFP联合作为检测肝癌的标志物的应用及其试剂盒。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]1.唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用。
[0007]2.唾液中ORM1、AFP和其结合抗体或片段在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用。
[0008]进一步，在上述应用中，通过该产品检测受试者唾液中的ORM1和AFP蛋白含量，并与对照水平相比较，当受试者唾液中的ORM1和AFP蛋白含量在大于对照水平时，诊断为肝癌患者。
[0009]进一步，唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用，所述产品为试剂、试剂盒或试纸。
[0010]进一步，唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用，所述产品为ELISA试剂盒。
[0011]进一步，唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用，所述唾液为唾液上清液。
[0012]3.一种判断受试者是否属于肝癌或非肝癌的检测产品，该检测产品中含有检测
ORM1和AFP蛋白含量的试剂。
[0013]进一步，所述判断受试者是否属于肝癌或非肝癌的检测产品中，使用检测ORM1和AFP蛋白含量的试剂可适应胶体金法、电泳法、免疫荧光法、直接竞争ELISA法、间接竞争ELISA法、双抗体夹心ELISA法、RIA法、流式细胞仪法或免疫层析法进行ORM1和AFP蛋白含量检测。
[0014]进一步，所述判断受试者是否属于肝癌或非肝癌的检测产品中，所述检测ORM1和AFP蛋白为检测唾液中的ORM1和AFP蛋白。
[0015]进一步，唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用、或所述判断受试者是否属于肝癌或非肝癌的检测产品中，判断受试者为肝癌或非肝癌检测的指标具体为：受试者唾液中ORM1蛋白含量在2484ng/ml以上，且唾液中AFP蛋白含量在107.5pg/ml以上为肝癌。
[0016]本专利技术的有益效果在于：本专利技术采用iTRAQ蛋白质组学方法，通过比较肝癌组与非肝癌组，筛选出了152个唾液组间差异表达蛋白，再依次采用免疫印迹、免疫组化和酶联免疫吸附试验在肝癌组织和唾液验证这些差异蛋白，发现唾液中α
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酸性糖蛋白1(orosomucoid 1，ORM1)和甲胎蛋白(α
‑
fetoprotein，AFP)在肝癌中表达显著增高(p<0.05)，并最终确定可定性肝癌的蛋白标志物。进一步采用统计学分析方法对唾液标志物的诊断效能进行统计分析，ORM1和AFP联合可作为检测肝癌的生物标志物，当唾液ORM1与AFP联合用于诊断肝癌时，曲线下面积(AUC)值为0.8726(95％置信区间：0.8104
‑
0.9347)，敏感性为78.3％，特异性为88％。充分说明唾液中ORM1和AFP联合可作为检测肝癌的生物标志物有一定的准确性和可行性，可作为唾液蛋白标志物在制备诊断肝癌的各种产品中进行应用，实现快速、便捷且无创的检测诊断，使得受试者方便早期筛查和监测，以及早发现早治疗，以免耽误病情，提高生存率。
附图说明
[0017]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0018]图1为各实验组蛋白质印迹验证结果，其中a：四组混合唾液样本中AFP、HP、ORM1、ARG1、COLT1、FCG3B和MMP9的代表性蛋白质印迹及其柱形图分析。b：四组个体唾液样本中AFP、HP、ORM1和MMP9的代表性蛋白质印迹及其柱形图分析。HCC：肝癌；LC：肝硬化；CHB：慢性病毒性乙型肝炎；NC：正常控制。数据显示为平均值
±
SD，*p<0.05，与肝硬化、慢性病毒性肝炎和正常对照相比。
[0019]图2为各实验组免疫组化验证结果，其中a：代表性免疫组化染色分析肝细胞癌组织和肿瘤邻近组织中AFP染色指数的差异。b：代表性免疫组化染色及分析ORM1在肝细胞癌组织和肿瘤邻近组织中染色指数的差异。c：肝细胞癌组织和肿瘤邻近组织中HP染色指数差异的代表性免疫组化染色分析。数据显示为带范围的中位数。
[0020]图3为各实验组ELISA验证结果，其中a：HCC、LC和CHB组中的血清AFP表达。b：HCC、LC、CHB和NC组中的唾液AFP表达。c：HCC、LC、CHB和NC组中唾液ORM1的表达。d：HCC、LC、CHB和NC组中唾液HP的表达。HCC：肝癌；LC：肝硬化；CHB：慢性病毒性乙型肝炎；NC：正常控制。数据显示为带范围的中位数。
[0021]图4为晚期肝癌(TNM III
‑
IV)和早期肝癌(TNM I
‑
II)中标志物的表达差异比较，其中a：早期和晚期肝癌之间的血清AFP表达差异。b：早期和晚期肝癌之间的唾液AFP表达差异。c：早期和晚期肝癌之间的唾液ORM1表达差异。d：早期和晚期肝癌之间的唾液HP表达差异。数据显示为带范围的中位数。
[0022]图5为不同疾病状态标志物的ROC分析。其中a：对照组为LC或CHB时血清AFP诊断HCC的受试者工作特征(ROC)曲线。b：对照组为LC或CHB时唾液AFP诊断HCC的ROC曲线。c：对照组为LC或CHB时唾液ORM1诊断HCC的ROC曲线。d：对照组为LC或CHB时唾液ORM1和唾液AFP联合诊断HCC的ROC曲线。HCC：肝癌；L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.唾液中ORM1和AFP联合作为蛋白标志物在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用。2.唾液中ORM1、AFP和其结合抗体或片段在制备检测肝癌或非肝癌的产品中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，通过该产品检测受试者唾液中的ORM1和AFP蛋白含量，并与对照水平相比较，当受试者唾液中的ORM1和AFP蛋白含量在大于对照水平时，诊断为肝癌患者。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂、试剂盒或试纸。5.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述产品为ELISA试剂盒。6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述唾液为唾液上清液。7.一种判断受试者是否属于肝癌或非肝癌的检测产品，其特征在于，该检测产品中含有检测ORM1和AFP蛋白含量的试剂。8.根据权利要求7所述判...

【专利技术属性】
技术研发人员：何佼侠，杨轶轩，胡怀东，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：