代谢工程方法、产角鲨烯工程菌、产橙花叔醇工程菌及其构建方法、应用技术

本申请适用于微生物技术领域，提供了代谢工程方法、产角鲨烯工程菌、产橙花叔醇工程菌及其构建方法、应用。所述代谢工程方法为过表达长非编码RNA PCGEM1和原癌基因c

【技术实现步骤摘要】
代谢工程方法、产角鲨烯工程菌、产橙花叔醇工程菌及其构建方法、应用


[0001]本申请属于微生物
，尤其涉及一种代谢工程方法、产角鲨烯工程菌、产橙花叔醇工程菌及其构建方法、应用。

技术介绍

[0002]随着合成生物学的发展，酿酒酵母已被广泛作为异源表达宿主来生产有价值的天然产物，这些天然产物包括单萜吲哚生物碱、青蒿酸和大麻素等。为了更加充分地利用酵母细胞工厂，越来越多的代谢工程策略被开发出来。对基因启动子和终止子的操控，以及对代谢通路上下游基因的融合、支架蛋白的构建和细胞器区室化的策略在一些重要化合物的生物合成中起到了很大的促进作用，同时，对酵母细胞内源亚细胞结构内质网膜的修饰能够提高角鲨烯及三萜类化合物的产量。
[0003]长非编码RNA在肿瘤细胞的发展和浸润过程中起着至关重要的作用。细胞内有一类能够募集组蛋白修饰复合物的转录因子，而长非编码RNA可指引这类转录因子到达染色体的指定位置，间接引起组蛋白结构的修饰，进而发挥调控作用。例如，长非编码RNA PCGEM1是前列腺癌细胞潜在的生物标记物和治疗靶点，它能够结合转录组因子c...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于长非编码RNA和原癌基因的代谢工程方法，其特征在于，所述代谢工程方法为过表达PCGEM1基因和c
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Myc基因；其中，所述PCGEM1基因为长非编码RNA编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述c
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Myc基因为原癌基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.一种根据权利要求1所述的基于长非编码RNA和原癌基因的代谢工程方法在构建酿酒酵母工程菌中的应用。3.一种产角鲨烯工程菌，其特征在于，所述产角鲨烯工程菌以酿酒酵母为出发菌株，过表达PCGEM1、c
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Myc、tHMGR、UPC2
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1和ERG9基因；其中，PCGEM1和c
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Myc基因整合到酵母基因组NDT80位点；tHMGR和UPC2
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1基因整合到酿酒酵母染色体TY3位点；ERG9基因启动子为组成型强启动子TPI1p。4.根据权利要求3所述的产角鲨烯工程菌，其特征在于，所述tHMGR和UPC2基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3～4所示；所述UPC2
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1基因是基于PCR的定点突变技术将转录因子基因UPC2突变为UPC2
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1，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述TPI1p启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。5.一种产橙花叔醇工程菌，其特征在于，所述产橙花叔醇工程菌以酿酒酵母为出发菌株，过表达PCGEM1、c
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Myc、tHMGR和UPC2
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1基因，抑制ERG9基因；其中，PCGEM1和c
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Myc基因整合到酵母基因组NDT80位点；tHMGR和UPC2
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1基因整合到酿酒酵母染色体TY3位点；ERG9基因启动子为葡萄糖抑制型启动子HXT1p。6.根据权利要求5所述的产橙花叔醇工程菌，其特征在于，所述tHMGR和UPC2基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3～4所示；所述UPC2
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1基因是基于PCR的定点突变技术将转录因子基因UPC2突变为UPC2
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1，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述HXT1p启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。7.一种产角鲨烯工程菌的构建方法，其特征在于，包括：将PGK1p、PCGEM1和CYC1t连接，构建基因表达模块PGK1p
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PCGEM1
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CYC1t，命名为模块I；将TEF1p、c
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Myc和ADH1t连接，构建基因表达模块TEF1p
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c
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Myc
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ADH1t，命名为模块II；将筛选标记HIS表达框、模块I和模块II连接，构建基因表达模块HIS
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PGK1p
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PCGEM1
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CYC1t
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TEF1p
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c
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Myc
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ADH1t，命名为模块III；将GAL1p、tHMGR和ADH1t连接，构建基因表达模块GAL1p
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tHMGR
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ADH1t，命名为模块IV；将GAL10p、UPC2
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1和CYC1t连接，构建基因表达模块GAL10p
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UPC2
‑1‑
CYC1t，命名为模块V；将模块V和模块VI连接，构建基因表达模块GAL1p
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tHMGR
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：安天悦，李德芳，王国丽，武振科，李明凯，郑秋生，
申请(专利权)人：滨州医学院，
类型：发明
国别省市：