低温提取弱碱性活蛋白技术制造技术

本发明专利技术提供了一种低温提取弱碱性活蛋白技术，该提取技术的步骤如下：S1：选用新鲜的猪皮洗净、灭菌；S2：除杂蛋白；S3：脱除脂肪，脱脂后溶胀；S4：溶胀后初步冻结，冻结后原料加入适量醋酸溶液，打浆，打浆后醋酸溶液进行一次提取，提取完毕后，过滤得提取液和滤渣；S5：蛋白提取液中加入蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，混均后置冰上备用；S6：收集细胞；S7：用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清；S8：细胞中加入蛋白提取液混匀后，振荡；S9：离心；将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品；本发明专利技术减少提取时间，降低提取过程的能耗，简化了工艺过程，提高了提取效率。了提取效率。

【技术实现步骤摘要】
低温提取弱碱性活蛋白技术


[0001]本专利技术主要涉及提取活蛋白的
，具体为低温提取弱碱性活蛋白技术。

技术介绍

[0002]活性蛋白是一种复杂的有机化合物。组成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸通过脱水缩合形成肽链。蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子，每一条多肽链有二十至数百个氨基酸残基不等；各种氨基酸残基按一定的顺序排列；现有活蛋白提取技术提取时间长，而且得率低、能耗高。

技术实现思路

[0003]为了改善上述
技术介绍
的问题，本专利技术提供低温提取弱碱性活蛋白技术。
[0004]本专利技术采用如下的技术方案：
[0005]一种低温提取弱碱性活蛋白技术，该提取技术的步骤如下：
[0006]S1：选用新鲜的猪皮，洗净后经过高温灭菌；猪皮切碎，置于75％乙醇中浸泡10
‑
15min，取出用低温去离子水浸泡冲洗3
‑
5次；
[0007]S2：将猪皮碎块放入0.6mol/L的氢氧化钠溶液浸泡除杂蛋白；
[0008]S3：采用碳酸钠和去离子水搅拌，排水，加去离子水清洗，脱除脂肪；脱脂后按照1∶30的比例加入醋酸溶液进行溶胀，醋酸溶液的浓度为0.6mol/L，溶胀温度为1
‑
4℃，溶胀时间为24
‑
28h；
[0009]S4：溶胀后初步冻结，冻结温度为
‑
25℃，冻结时间为2h；冻结后原料加入适量浓度为0.6mol/L的醋酸溶液，4℃下进行打浆破碎30s，打浆后颗粒大小在2mm以内，打浆及环境温度为4℃；然后向其中加入0.5mol/L的醋酸溶液进行一次提取36小时，原料与醋酸溶液的重量体积比为1∶20，提取完毕后，以40
‑
50目纱网过滤，得提取液和滤渣；
[0010]S5：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混均后置冰上备用；
[0011]S6：取5
‑
10
×
106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5
‑
10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
[0012]S7：用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清；
[0013]S8：每5
×
106个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15
‑
20min；
[0014]S9：在4℃，14000rpm条件下离心15min；快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品；
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0016]本专利技术减少提取时间，降低提取过程的能耗，简化了工艺过程，提高了提取效率。
具体实施方式
[0017]为了便于理解本专利技术，给出了本专利技术的实施例，但是本专利技术可以通过不同的形式来实现，并不限于文本所描述的实施例，相反的，提供这些实施例是为了使对本专利技术公开的内容更加透彻全面。
[0018]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常连接的含义相同，本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语知识为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术，本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0019]实施例1
[0020]一种低温提取弱碱性活蛋白技术，该提取技术的步骤如下：
[0021]S1：选用新鲜的猪皮，洗净后经过高温灭菌；猪皮切碎，置于75％乙醇中浸泡10
‑
15min，取出用低温去离子水浸泡冲洗3
‑
5次；
[0022]S2：将猪皮碎块放入0.6mol/L的氢氧化钠溶液浸泡除杂蛋白；
[0023]S3：采用碳酸钠和去离子水搅拌，排水，加去离子水清洗，脱除脂肪；脱脂后按照1∶30的比例加入醋酸溶液进行溶胀，醋酸溶液的浓度为0.6mol/L，溶胀温度为1
‑
4℃，溶胀时间为24
‑
28h；
[0024]S4：溶胀后初步冻结，冻结温度为
‑
25℃，冻结时间为2h；冻结后原料加入适量浓度为0.6mol/L的醋酸溶液，4℃下进行打浆破碎30s，打浆后颗粒大小在2mm以内，打浆及环境温度为4℃；然后向其中加入0.5mol/L的醋酸溶液进行一次提取36小时，原料与醋酸溶液的重量体积比为1∶20，提取完毕后，以40
‑
50目纱网过滤，得提取液和滤渣；
[0025]S5：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用；
[0026]S6：取5
‑
10
×
106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5
‑
10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
[0027]S7：用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清；
[0028]S8：每5
×
106个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15
‑
20min；
[0029]S9：在4℃，14000rpm条件下离心15min；快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品；
[0030]上述对本专利技术进行了示例性描述，显然本专利技术具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本专利技术的方法构思和技术方案进行的这种非实质改进，或未经改进将本专利技术的构思和技术方案直接应用于其他场合的，均在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低温提取弱碱性活蛋白技术，其特征在于，该提取技术的步骤如下：S1：选用新鲜的猪皮，洗净后经过高温灭菌；猪皮切碎，置于75％乙醇中浸泡10
‑
15min，取出用低温去离子水浸泡冲洗3
‑
5次；S2：将猪皮碎块放入0.6mol/L的氢氧化钠溶液浸泡除杂蛋白；S3：采用碳酸钠和去离子水搅拌，排水，加去离子水清洗，脱除脂肪；脱脂后按照1∶30的比例加入醋酸溶液进行溶胀，醋酸溶液的浓度为0.6mol/L，溶胀温度为1
‑
4℃，溶胀时间为24
‑
28h；S4：溶胀后初步冻结，冻结温度为
‑
25℃，冻结时间为2h；冻结后原料加入适量浓度为0.6mol/L的醋酸溶液，4℃下进行打浆破碎30s，打浆后颗粒大小在2mm以内，打浆及环境温度为4℃；然后向其中加入0.5mo...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳光祥，
申请(专利权)人：靳光祥，
类型：发明
国别省市：