喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得BmNPV病蛹的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，包括：使用浓度为105‑

【技术实现步骤摘要】
喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得BmNPV病蛹的方法


[0001]本专利技术涉及家蚕抗病育种
，更具体地说，本专利技术涉及一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法。

技术介绍

[0002]家蚕血液型脓病(BmNPV)是一种家蚕亚急性传染病，是造成蚕业生产减产的主要病害之一，在广西亚热带高温季节尤为严重。此病的发生是家蚕被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)侵染引起的，传染方式主要为食下传染和创伤传染，所以含有病原的蚕粪、蚕尸、病蚕接触过的含有病原的环境和物品都能成为再传染源。
[0003]家蚕的生物特性和一定空间内蚕群集中的高密度的饲养方式决定了此病发生一旦发生，具有损失大，传染快的特点，也决定了家蚕血液型脓病的防治重点是在群体控制，而非个体的控制和治疗。所以家蚕抗病育种就显得尤为重要。而家蚕抗病育种一般采用的添食BmNPV进行蛾区或个体筛选，整个选育过程中需要用到大量的BmNPV。
[0004]中国专利CN108220250A公开了家蚕活体穿剌接种的方法进行病毒扩繁，存在的不足为：1、蚕体注射不易操作；2、蚕发病时会狂躁爬行，对环境病原污染有一定风险；3、在病蚕收集破碎时，大蚕的皮肤、丝腺不易破碎；4、蚕还处于食桑阶段，破碎后杂质较多，影响病原提纯；5、家蚕幼虫可合并感染多种BmNPV、CPV、FV等多种病毒病，采用幼虫扩繁的BmNPV难以制备不含其它病毒病的BmNPV多角体病毒。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
[0006]本专利技术的另一个目的是提供一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，其在5龄蚕末期或蛹期对家蚕进行喂食带毒桑叶或接种病蚕血液，使得蚕发病在上蔟之后，不会出现蚕期发病时狂躁爬行现象，蛹体较静，穿刺接种时比活泼的蚕体操作方便和简单，蛹体比蚕体更容易破碎、且破碎后的溶液比进食期的蚕破碎后杂质更少，容易提取病毒，扩繁效率高，成本低，获得的病原不含其它病毒病原。
[0007]为了实现本专利技术的这些目的和其它优点，本专利技术提供一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接种获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，包括：
[0008]使用浓度为105‑
109PIB/ml的BmNPV病毒液浸渍桑叶得到带病毒桑叶；
[0009]A：选用BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕，喂食带病毒桑叶，保证蚕成熟前的2天内喂桑中，有1次喂食的是带病毒桑叶，蚕成熟后上蔟结茧化蛹后，发病得到所述BmNPV病蛹；
[0010]或B：选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，喂食正常桑叶，直至活蚕出现典型病状，然后取活蚕血液，接种至BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕上，蚕成熟后上蔟结茧化蛹后，发病得到所述BmNPV病蛹；
[0011]或C：选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，喂食正常桑叶，直至活蚕出现典型病状，然后取活蚕血液，接种至化蛹24
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48小时的BmNPV敏感品系健康
蚕蛹上，发病得到所述BmNPV病蛹。
[0012]根据蚕的特性，蚕成熟之前需要充分进食饱食后，才能成熟上蔟结茧，结茧大概在上蔟后2天内成型，上蔟4天左右完成结茧并化蛹，即5龄期蚕末期至结茧化蛹的时间为4～5天，根据此特性，申请人设计的上述A、B或C方案均能够保证蚕发病在上蔟结茧之后，在此阶段发病不会出现蚕期发病时狂躁爬行现象，蛹体较静，穿刺接种时比活泼的蚕体操作方便和简单，蛹体比蚕体更容易破碎、且破碎后的溶液比进食期的蚕破碎后杂质更少，容易提取病毒，扩繁效率高，成本低，从而解决
技术介绍
中提到的传统家蚕活体穿刺接种存在的问题。
[0013]并且，在B和C的病毒复壮过程中，选用5龄期的起蚕，喂食带病毒桑叶，然后取活蚕血液，5龄期的起蚕具有几个特点：第一、体型大，血液充足，容易抽取血液；第二、进食量大，生长快，能够快速取食带病毒桑叶而发病；第二、在5龄期中，5龄期的起蚕对病毒较为敏感，抵抗力低，因此容易得到发病蚕。
[0014]优选的是，所述的喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法中，所述A中，使用BmNPV病毒液的病毒浓度为105PIB/ml，桑叶浸泡于病毒液中10分钟，然后晾干得到所述带病毒桑叶；
[0015]所述B和C中，使用BmNPV病毒液的病毒浓度为109PIB/ml，桑叶浸泡于病毒液中10分钟，然后晾干得到所述带病毒桑叶。
[0016]上述技术方案中，A的喂食使用105的较低病毒浓度的病毒液，结合蚕正常的桑叶采食量，可以保证大多数蚕摄入合适量的病毒，避免出现摄入病毒量过大，后期能结茧但不能化蛹的情况，也可以避免摄入病毒量过少，而无法发病的情况。B和C的喂食使用109的较高浓度病毒液，能够使得5龄期蚕快速发病，而获得大量活蚕血液，提高了效率。
[0017]优选的是，所述的喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法中，所述A中，具体为蚕成熟当天或前一天开始喂食带病毒桑叶，蚕成熟上蔟，未成熟的蚕继续喂食正常桑叶。
[0018]常规的养蚕方法中，1日喂食1～4次桑叶，业内也称1日1～4回育，在本专利技术中，使用的是1日2回育。喂食的病毒桑叶的量和常规饲养的量无区别，保证蚕饱食即可。例如，按蛾区(1个蛾区平均400头蚕)计算，5龄蚕整个蚕期(按6天算)喂食桑叶6kg，这样1个蛾区一次大概喂叶0.5kg。
[0019]优选的是，所述的喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法中，所述B和C中，为保证蚕饱食带病毒桑叶，在喂食带病毒桑叶后，等待8～12小时，待带病毒桑叶被食光后或接近被食光后，再使用正常桑叶喂食。
[0020]优选的是，所述的喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法中，喂食带病毒桑叶5～6天后收集出现典型病状的的活蚕，使用酒精对活蚕体表进行消毒，体表晾干后，剪尾收集血液，收集的血液马上用于接种，或冷藏保存时间不超过6小时内使用。
[0021]优选的是，所述的喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法中，针对B中的5龄末期健康蚕的接种方法为：取消毒好的注射器抽取所述活蚕血液，蚕体头往尾方向数，从第6
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9环节的任一节间膜处，剌入家蚕体壁，接种所述活蚕血液；
[0022]针对C中的健康蚕蛹的接种方法为：取消毒好的注射器抽取所述病蚕血液，蛹体头往尾方向数，从蛹背部第2或第3环节将蛹皮轻轻刺破，将活蚕血液接种到蚕蛹中。
[0023]优选的是，所述的喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法中，所述A和B中，蚕成熟上蔟后，在25～26℃温度，65％空气湿度条件下正常生长，上蔟2天后采蚕，再过2天后蚕化蛹，削茧得到蛹，蛹经过3～4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，其特征在于，包括：使用浓度为105‑
109PIB/ml的BmNPV病毒液浸渍桑叶得到带病毒桑叶；A：选用BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕，喂食带病毒桑叶，保证蚕成熟前的2天内喂桑中，有1次喂食的是带病毒桑叶，蚕成熟后上蔟结茧化蛹后，发病得到所述BmNPV病蛹；或B：选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，第2喂食后改为正常桑叶，直至活蚕出现典型病状，然后取活蚕血液，穿刺接种至BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕上，蚕成熟后上蔟结茧化蛹后，发病得到所述BmNPV病蛹；或C：选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，喂食正常桑叶，直至活蚕出现典型病状，然后取活蚕血液，穿刺接种至化蛹24
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48小时的BmNPV敏感品系健康蚕蛹上，发病得到所述BmNPV病蛹。2.如权利要求1所述的通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，其特征在于，所述B和C中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄文功，安春梅，浦月霞，吴静颜，兰艳妮，李枫烨，谭福洋，刘艳伟，黄胜，苏红梅，韦博尤，黄玲莉，闭立辉，张桂征，蒙艺英，黄扬玉，陶积阳，陆俣伽，黄凌，罗群，杨奇保，毛洪斌，冉艳萍，覃萍，苏艳环，卢柏强，
申请(专利权)人：广西壮族自治区蚕业技术推广站，
类型：发明
国别省市：