一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法及其应用技术

一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法及其应用，本发明专利技术涉及一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法及其应用。本发明专利技术的目的是为了解决现有表面增强拉曼光谱技术检测细菌的方法不具有通用性的问题，本发明专利技术用硼氢化钠还原硝酸银生成银溶胶，加入卤化物孵育制备增强基底，将增强基底与细菌样品混合，然后加入硼氢化钠溶液充分混合，再进行SERS检测。本发明专利技术的方法通过特征峰不但能区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，还能区分同种类型细菌分子的敏感株和耐药株。并首次利用其拉曼峰值比例，得到了抗生素作用后细菌死亡速度加快的拐点。本发明专利技术应用于细菌检测领域。领域。领域。

【技术实现步骤摘要】
一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法及其应用。

技术介绍

[0002]近年来随着抗生素的滥用，出现了大量的超级细菌和多重耐药菌对人类健康已造成极大的危害。所以细菌的快速检测尤为重要，目前传统的细菌检测流程，首先细菌进行分离、富集和扩增。然后在细菌培养后通过形态学特征、显微镜和简单试剂的快速生化测试来确定属。其次通过有针对性的生化或血清学试验对物种水平进行鉴定。耐药性细菌可能携带不同的耐药性基因，检测方法需要高度的特异性，尽可能准确地识别细菌属和种类，以及敏感性特征。
[0003]利用表面增强拉曼光谱很难直接获得生物分子本身的SERS信号。在微生物领域SERS的应用还停留在利用探针分子定性识别某种生物分子(细菌或者真菌)，这种带标签的检测技术设计复杂、通用性差，很难推广。目前无标签SERS检测技术针对某种特征的生物分子设计了不同类型的增强基底，虽然这些方法兼具灵敏性和信号稳定性，但却只能针对单一的生物分子，例如，钙离子引导的银纳米颗粒和盐酸羟胺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、制备增强基底：a、制备浓度为0.05
‑
0.25g/L的硼氢化钠溶液，然后制备浓度为1
‑
15g/L的硝酸银溶液，再在搅拌条件下，将硝酸银溶液加入到硼氢化钠溶液中，得到银溶胶，其中硝酸银溶液与硼氢化钠溶液的体积比为1：(50
‑
150)；b、将银溶胶离心，去上清，离心产物与卤化物溶液在室温下孵育30
‑
180min，得到增强基底；离心产物与卤化物溶液的体积比为10：(0.5
‑
5)；二、将增强基底与细菌样品混合，然后加入1.4
‑
2.4g/L的硼氢化钠溶液充分混合，再进行SERS检测，检测条件为：激光波长为633nm，扫描时间为10
‑
60s，激光能量20mW；其中增强基底、细菌样品与硼氢化钠溶液的体积比为10：(0.5
‑
5)：(0.5
‑
5)。2.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法，其特征在于步骤一中0.05
‑
0.25g/L的硼氢化钠溶液的制备方法为：称取硼氢化钠溶于去离子水中，在1500
‑
2000转/分钟条件下搅拌8分钟。3.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法，其特征在于步骤一中硝酸银溶液直接倒入或滴加到硼氢化钠溶液中，若是滴加到硼氢化钠溶液中，则滴加速度为8
‑
12滴/秒。4.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术无标签检测细菌的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洋，孙建平，王蕴鹏，王晓童，
申请(专利权)人：哈尔滨医科大学，
类型：发明
国别省市：