一种重组anti-miR-129-5p及其制备方法和在抗皮肤衰老中的应用技术

本发明专利技术属于分子生物学及医学技术领域，公开了一种重组anti

【技术实现步骤摘要】
一种重组anti
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miR
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129
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5p及其制备方法和在抗皮肤衰老中的应用


[0001]本专利技术属于分子生物学及医学
，尤其涉及一种重组anti
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miR
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129
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5p及其制备方法和在抗皮肤衰老中的应用。

技术介绍

[0002]目前，人体皮肤位于人体的最外层，直接受外界环境等多种因素的影响。衰老的皮肤中表皮更新减慢、屏障功能减弱、角质形成细胞活力下降、表皮受伤后修复能力减弱，其中屏障功能减弱后导致皮肤干燥、脱屑、皱纹等。真皮衰老表现为真皮层中成纤维细胞数量逐渐减少，其厚度变薄、合成胶原蛋白和弹性蛋白的能力下降、分解增加，I、III型胶原比值呈现倒置，胶原逐渐变粗并出现异常交链，许多代谢相关的酶类活性下降，胞外间质中透明质酸和硫酸皮肤素含量明显下降，糖胺多糖总含量下降。成纤维细胞作为真皮中最主要细胞成分，其在增殖能力及功能行使上的逐渐衰老是导致皮肤衰老变化的重要原因之一。
[0003]MicroRNA(miRNA)是单链的非编码小分子RNA，长度约20～24个核苷酸，通过碱基配对结合在mRNA的3
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UTR或直接降解mRNA从而调控基因的表达。基因与皮肤的衰老密切相关，随着年龄的增加，细胞对DNA的修复能力下降，引起细胞凋亡，以及相关细胞活性的基因受到抑制。所以miRNA参与了很多与衰老相关的重要过程，被广泛认为是衰老的关键调控因子。研究发现在真皮组织中miR
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129
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5p的表达上调可能降低成纤维细胞活性、抑制胶原合成，从而参与真皮组织的衰老过程。
[0004]目前用于研究的RNA试剂，主要采用化学合成，但化学合成的RNA，不仅价格昂贵产率低，而且为提高稳定性可能带有较多的人工基因修饰，造成RNA折叠、生物活性及安全性受到影响。
[0005]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前用于研究的RNA试剂价格昂贵且产率低，而且为提高稳定性可能带有较多的人工基因修饰，造成RNA折叠、生物活性及安全性受到影响。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种重组anti
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miR
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129制备方法及其应用，尤其设计一种重组anti
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miR
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129
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5p及其制备方法和在抗皮肤衰老中的应用。
[0007]本专利技术是这样实现的，一种重组基因，所述重组基因的序列为SEQ ID NO：1，或为与SEQ ID NO：1所示序列相似度达90％以上的序列。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供一种应用所述的重组基因的重组anti
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miR
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129的制备方法，所述重组基因的制备方法包括：
[0009]根据genebank数据库中设计anti
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miR
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5p引物并进行载体构建；设计anti
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miR
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5p，将设计的小干扰RNA anti
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miR
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5p嵌合于tRNA支架，在大肠杆菌中重组表达。
[0010]进一步，所述小干扰RNA anti
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miR
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129
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5p的序列为SEQ ID NO：2。
[0011]进一步，所述嵌合序列为与SEQ ID NO：2序列相似度达90％以上的序列。
[0012]进一步，所述tRNA支架的序列为与人丝氨酸tRNA序列相似度达90％以上的序列，所述人丝氨酸tRNA序列为SEQ ID NO：3。
[0013]进一步，所述小干扰RNA anti
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miR
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5p的前体序列为成熟序列部分被anti
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miR
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5p序列取代的hsa
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miR
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34a前体序列，所述小干扰RNA anti
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miR
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5p的前体序列为SEQ ID NO：4。
[0014]进一步，所述重组anti
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miR
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129的制备方法具体包括以下步骤：
[0015]步骤一，设计合成嵌合anti
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miR
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5p序列的hsa
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miR
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34a前体引物；
[0016]步骤二，利用pBSMrnaSeph质粒在tRNA反密码子环处具有的酶切位点，将小干扰RNA anti
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miR
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5p的前体序列插入pBSMrnaSeph质粒中，构建表达载体；
[0017]步骤三，将嵌合目标序列的表达载体转化感受态大肠杆菌；
[0018]步骤四，大肠杆菌培养扩增后，提取菌内总RNA，以FPLC分离纯化目标重组anti
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miR
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129
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5p。
[0019]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的重组anti
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miR
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129在抗衰化妆品制备中的应用。
[0020]进一步，所述抗衰化妆品的剂型包括膏霜类、乳液类、液洗类和水剂类。
[0021]结合上述的技术方案和解决的技术问题，请从以下几方面分析本专利技术所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
[0022]第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本专利技术的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本专利技术技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：
[0023]本专利技术以人丝氨酸tRNA嵌合has
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miR
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34a前体，人丝氨酸tRNA为人源tRNA，用其作为支架生产的重组小RNA的开发前景更好，因为人体细胞中本身含有丝氨酸tRNA，但无细菌来源的甲硫氨酰tRNA，因此用人丝氨酸tRNA为支架其毒性及免疫原性可能更低。本专利技术缩短了所表达的重组tRNA的长度，从而降低了细胞毒性，提高了表达量。本专利技术对has
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miR
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34a前体中的序列进行改造，改善互补配对，提高重组anti
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miR
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5p的稳定性；通过生物工程获得的重组anti
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miR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组基因，其特征在于，所述重组基因的序列为SEQ ID NO：1。2.如权利要求1所述的重组基因，其特征在于，所述重组基因的序列为与SEQ ID NO：1所示序列相似度达90％以上的序列。3.一种应用如权利要求1所述的重组基因的制备方法，其特征在于，所述重组基因的制备方法包括：根据genebank数据库中设计anti
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miR
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5p引物并进行载体构建；设计anti
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miR
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5p，将设计的小干扰RNA anti
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5p嵌合于tRNA支架，在大肠杆菌中重组表达。4.如权利要求3所述的重组基因的制备方法，其特征在于，所述小干扰RNA anti
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miR
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5p的序列为SEQ ID NO：2。5.如权利要求4所述的重组基因的制备方法，其特征在于，所述嵌合序列为与SEQ ID NO：2序列相似度达90％以上的序列。6.如权利要求2所述的重组进一步的制备方法，其特征在于，所述tRNA支架的序列为与人丝氨酸tRNA序列相似度达90％以上的序列，所述人丝氨酸tRNA序列为SEQ ID NO：3。7.如权利要求3所述的重组基因的制备方法，其特征在于，所述小干扰RNA anti
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miR
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129
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5p的前体序列为成熟序列部分...

【专利技术属性】
技术研发人员：董永花，张伟杰，
申请(专利权)人：吉布森生物科技陕西有限公司，
类型：发明
国别省市：