WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，将WDHD1作为肿瘤基因用于预测肝癌转移及复发的方法，通过肝癌组织芯片的筛选，分析得到了在癌组织及相应癌旁组织中差异表达的基因，通过结合肝癌组织芯片结果与TCGA数据库中的数据，分析发现WDHD1在肝癌组织中表达上调，通过相关组织样本验证实验、分子生物学及细胞生物学实验验证WDHD1与肝癌的转移及复发密切相关，可作为一种生物标记物用于肝癌转移复发的评估预测。癌转移复发的评估预测。癌转移复发的评估预测。

【技术实现步骤摘要】
WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，具体涉 及通过肝癌组织芯片技术筛选相应的肝癌基因确定肝癌的转移及复发的方法。

技术介绍

[0002]肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是发病率最高的肿瘤之一，而且在全球范 围内是恶性肿瘤相关死亡的主要原因。当前在临床上对于HCC的治疗方法主要是肿瘤手术切 除、肝移植、免疫疗法和人工肝治疗等。由于肝移植肝源的短缺，肿瘤根治性切除仍然是当 前最可行、最有效的方法。而HCC术后高复发转移率、整体较低的中长期生存率等仍然是当 前临床上所面临的巨大挑战。血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是HCC诊断、复发 监测的“金标准”，但临床上仍有30％肝癌患者的AFP水平在正常范围内，敏感性和特异性 不高使其在肝癌的临床诊断中有较为明显的限制。因此，挖掘新的生物标志物用于肝癌患者 的临床诊断或作为新的药物研发的靶点将非常有意义。
[0003]目前已有相关的研究，例如中国专利申请号CN201210002295.7公开了WDHD1基因的用途， 用于制备诊断肝癌的产品，还公开了一种用于诊断肝癌的试剂盒，该试剂盒包含特异性针对 WDHD1基因的引物或探针，或包含特异性结合WDHD1蛋白的抗体，所述的WDHD1基因，可作 为诊断肝癌的特异标志基因，使肝癌诊断更加准确、快速。
[0004]然而，肝癌的发生发展是一个涉及多个病理变化的复杂过程，包括肝细胞的坏死、再生、 纤维化及持续发生的炎症反应，而目前研发人员对肝癌发生及进展的相关机制的认识非常有 限，这制约了研发人员对新的临床诊断标志物的开发与抗癌药物的研发。因此，深入探索肝 癌的发病及进展的相关机制，在分子层面提高研发人员对肝癌的认识将推动临床上肝癌诊疗 能力的发展。
[0005]近年来，随着各类测序方法的快速发展及多种组学研究的兴起，研发人员对肝癌等恶性 肿瘤的机制研究有了更好的契机。越来越多的基因被发现通过多种途径参与癌症的发生及进 展，然而仍有较多分子在肝癌发生发展中的相关机制研究待研发人员进一步完善。
[0006]WDHD1(WD repeat and HMG
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box DNA binding protein 1，又名And
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1、CTF4)是一种 天然的嵌合DNA结合蛋白，该蛋白含有WD40结构域和HMG结构域。通过基因序列比对分析， 目前已发现在136种人类蛋白中含WD40结构域，且在乳腺癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、食管癌 等多种肿瘤中高表达，其可能在信号转导、起始前复合物的组装、pre
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mRNA加工和作为适配 器/调节模块参与细胞骨架组装中发挥作用。HMG结构域参与染色质组装，转录和复制，是着 丝粒功能的关键调节因子。
[0007]WDHDI蛋白是Ctf4于人类的同系物，研究表明，Ctf4主要在调节端粒的复制、维持基因 复制的保真性以及不连续复制等方面起着重要作用。WDHD1可作为复制起始因子，将MCM2
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7 解旋酶和DNA聚合酶/引物酶复合物结合在一起，以启动DNA复制。此外，WDHD1能够破坏组 蛋白乙酰基转移酶复合体GCN5与泛素化连接酶CRL4复合体的相互作用从而防止
GCN5被泛素 化降解(GCN5可以乙酰化组蛋白)。最新研究表明，WDHD1作为STAT3靶基因，启动子区可 与STAT3结合，介导了STAT3的DNA复制功能。尽管前述研究已表明WDHD1对细胞结构的稳 定、DNA的复制等方面发挥重要作用，但研发人员对WDHD1参与肿瘤发病及进展的相关机制 仍知之甚少，尤其是在肝癌中仍属空白。

技术实现思路

[0008]针对现有研究表明WDHD1对细胞结构的稳定、DNA的复制等方面发挥重要作用，但对WDHD1 参与肿瘤发病及进展的相关机制仍知之甚少，尤其是在肝癌中仍属空白的问题，本专利技术提供 了WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，具体是通过肝癌组织芯片技术筛选相应的肝癌 基因确定肝癌的转移及复发的方法，前期通过肝癌组织芯片的筛选，分析得到了在癌组织及 相应癌旁组织中差异表达的基因，通过实验的验证并结合文献分析从而将WDHD1作为候选基 因做进一步的肝癌相关机制研究。
[0009]本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：
[0010]WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，包括如下步骤：
[0011]1)采用普通PCR法对肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1的mRNA表达情况进行验证； western blot对肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1蛋白表达情况进行验证；免疫组化法检测 肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1的蛋白表达情况；
[0012]2)采用qRT
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PCR检测多种肝癌细胞系及正常肝脏细胞系中WDHD1的表达情况；
[0013]3)在WDHD1相对高表达的肝癌细胞转染相应siRNA抑制基因表达，观察其对增殖及迁移 的影响；
[0014]4)在WDHD1相对低表达的肝癌细胞系中感染相应慢病毒，构建过表达细胞株，观察其对 增殖及迁移的影响；
[0015]5)WDHD1过表达的肝癌细胞及相应对照细胞接种BALB/c
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nu裸鼠，检测WDHD1对裸鼠成 瘤能力的影响。
[0016]本专利技术中：
[0017]所述的步骤1)是采用普通PCR法对10对肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1的mRNA表 达情况进行验证；western blot对3例肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1蛋白表达情况进行 验证；免疫组化法检测了30例肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1的蛋白表达情况。
[0018]步骤2)所述的检测多种肝癌细胞系，是检测10种肝癌细胞系。
[0019]所述的步骤3)是在WDHD1相对高表达的肝癌细胞转染相应siRNA抑制基因表达，而后 采用CCK
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8法、平板克隆法、划痕实验及transwell分别观察其对增殖及迁移的影响。
[0020]所述的步骤4)是在WDHD1相对低表达的肝癌细胞系中感染相应慢病毒，构建过表达细 胞株，而后采用CCK
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8法、平板克隆法及transwell分别观察其对增殖及迁移的影响。
[0021]和现有技术相比，本专利技术具有如下优点：
[0022]本专利技术所述的WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，通过结合检测肝癌组织中WDHD1 的表达情况及肝癌细胞中WDHD1的表达，分析发现WDHD1在肝癌组织中表达上调，再通过相 关分子生物学及细胞生物学实验验证WDHD1在肝癌转移复发中的作用，以求为肝癌转移及复 发的临床评估能力得到提高。
【附图说明】
[0023]图1是本专利技术实施例中TCGA数据库中WDHD1的相关表达情况的图；
[0024]图2是本专利技术实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，其特征在于：包括如下步骤：1)采用普通PCR法对肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1的mRNA表达情况进行验证；western blot对肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1蛋白表达情况进行验证；免疫组化法检测肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD1的蛋白表达情况；2)采用qRT
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PCR检测多种肝癌细胞系及正常肝脏细胞系中WDHD1的表达情况；3)在WDHD1相对高表达的肝癌细胞转染相应siRNA抑制基因表达，观察其对增殖及迁移的影响；4)在WDHD1相对低表达的肝癌细胞系中感染相应慢病毒，构建过表达细胞株，观察其对增殖及迁移的影响；5)WDHD1过表达的肝癌细胞及相应对照细胞接种BALB/c
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nu裸鼠，检测WDHD1对裸鼠成瘤能力的影响。2.根据权利要求1所述的WDHD1基因在肝癌转移复发预测中的应用，其特征在于：所述的步骤1)是采用普通PCR法对10对肝癌组织及相应癌旁组织中WDHD...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖维甲，徐文涛，廖敏君，陈红松，陈冬波，秦琬莹，李政利，陈谱，任立赢，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：