一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针及应用制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针，该特异性荧光探针可以在人血清、血浆或尿液中经人血清白蛋白特异性水解，生成荧光发射光谱与底物有显著差异的产物。测定单位时间内水解产物的生成量定量检测白蛋白的含量。该特异性探针为N

【技术实现步骤摘要】
一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针及应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针及应用。

技术介绍

[0002]人血清白蛋白(HSA)是由肝脏合成，分泌到血浆中。是血浆中含量最丰富的蛋白质，约占血浆总蛋白量的一半左右。在参与免疫调节、转运内外源性物质、维持人体内酸碱平衡等方面发挥重要作用。体液中白蛋白的水平与健康状况密切相关，当肾脏受损时，患者尿液中HSA水平升高，临床上通过比较血浆和尿液中白蛋白水平可以有效诊断肾脏疾病，同时体液中HSA的水平变化还与高血压、风湿性关节炎、糖尿病、肝硬化等多种疾病的发生、发展过程密切相关。因此，白蛋白含量测定具有重要的意义和应用价值。
[0003]目前，白蛋白的定量检测方法包括：免疫测定法、蛋白质质谱法和染料结合法等方法。免疫测定法和蛋白质质谱法虽然特异性好，但操作复杂，成本高。染料结合法虽然操作简单、成本低，但特异性差，容易受到其他物质干扰。目前临床检测HAS含量常用的溴甲酚绿比色法，具有很强的时间相关性，不利于HSA的精确测试。
[0004]本专利技术提供了一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针及应用，其在人血清白蛋白的假酯酶活性作用下，发生类水解反应，生成荧光发射波谱不同于底物的水解产物。该酶促反应具有高选择性、酶活性评价快速高效等特点。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针，利用该特异性荧光探针可以检测不同生物体系中人血清白蛋白的含量。
[0006]本专利技术的目的在于提供一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针，该特异性荧光探针可以在人血清、血浆或尿液中经人血清白蛋白特异性水解，生成荧光发射光谱与底物有显著差异的产物。测定单位时间内水解产物的生成量定量检测白蛋白的含量。该特异性探针为N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物。其结构通式如式(1)所示，其中R为
‑
F、
‑
CF3、
‑
NO2中的任意一种。
[0007][0008]本专利技术还提供了所述特异性荧光探针作为HSA的特异性底物，发生水解反应，生成
式(1)的特异性代谢产物，通过定量检测单位时间内底物的水解量和产物的生成量来测定不同生物样品中白蛋白的含量；具体测定方法为：
[0009]——体系中以N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物作为特异性探针底物；底物浓度选择1/10
‑
10Km；单点测定时底物浓度优选Km；
[0010]——在磷酸缓冲液等常用缓冲溶液中，反应温度为20
‑
60℃，优选37℃作为最佳反应温度；孵育体系pH介于5.5
‑
10.5之间，优选pH值为7.4作为最佳反应pH值；
[0011]——反应时间为5
‑
120分钟，在确保以上底物相应的水解产物达到定量限；
[0012]——测定单位时间内底物水解量和产物的生成量作为HSA活性的评价指标；
[0013]本专利技术提供的人血清白蛋白特异性探针底物的应用，探针底物及水解产物均具有荧光属性，采用荧光检测器可以实现底物及产物的快速灵敏检测。检测条件为：激发波长300
‑
500nm，发射波长410
‑
600nm。
[0014]本专利技术所提供的特异性荧光探针可用于人血清、血浆和尿液中白蛋白的定量测定。
[0015]选用本专利技术所述HSA特异性探针检测HSA具有以下突出优势：
[0016](1)高特异性：N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物可被HAS高特异性代谢，生成C
‑
4酯键断裂的水解产物；
[0017](2)廉价易得：N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物均可经化学合成获得，合成工艺简单易行；
[0018](3)高灵敏度：具有N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体结构的化合物，均具有良好的荧光光谱发射特性410
‑
600nm，该底物及其水解产物具有不同的荧光光谱发射特征，能较好的进行区分检测，同时可通过绘制标准曲线进行定量测定；
[0019](4)检测重现性好：N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的2
‑
氟联苯甲酰酯荧光探针分子C与原荧光探针E相比，测定同一酶原孵化样品时，相对标准偏差更小，可以获得比原荧光探针分子E重现性更好的数据。
附图说明
[0020]图1.N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物的结构式；其中，A为荧光探针分子A，B为荧光探针分子B，C为荧光探针分子C，D为荧光探针分子D，E为原荧光探针分子E；
[0021]图2.N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的2
‑
氟联苯甲酰酯的ESI
‑
MS谱图；
[0022]图3.N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的2
‑
氟联苯甲酰酯的1H
‑
NMR谱图；
[0023]图4.N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的2
‑
氟联苯甲酰酯荧光探针分子C与N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯原荧光探针分子E测定同一酶原孵化样品重现性比较。
具体实施方式
[0024]下面的实施例将对本专利技术予以进一步的说明，并不因此而限制本专利技术。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.本发明的目的在于提供一类检测人血清白蛋白的特异性荧光探针，该特异性荧光探针可以在人血清、血浆或尿液中经人血清白蛋白特异性水解，生成荧光发射光谱与底物有显著差异的产物。测定单位时间内水解产物的生成量定量检测白蛋白的含量。该特异性探针为N
‑
正丁基
‑4‑
羟基
‑
1,8
‑
萘酰亚胺母体C
‑
4羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物。其结构通式如式(1)所示，其中R为
‑
F、
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国良，谷野，王岩，段明郁，陈峰扬，
申请(专利权)人：沈阳北创医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：