α-二羰基化合物的检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种α

【技术实现步骤摘要】
α
‑
二羰基化合物的检测方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物化学分析领域，特别是涉及一种α
‑
二羰基化合物的检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]α
‑
二羰基化合物是一类主要来自食物热加工和机体糖代谢过程产生的活泼中间体和反应性代谢物。这类物质能对蛋白质、DNA等体内重要生命物质进行化学修饰，导致其结构改变和功能损害，从而引起衰老或糖尿病等多种疾病，在食品安全和生物医学领域日益引发关注。因此，如何检测这类潜在危害物在食物和生物样品中的种类、含量和变化，对健康饮食和防治疾病具有重要意义。
[0003]α
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二羰基化合物具有强亲水性，且稳定性较低、缺少紫外吸收基团及荧光发色基团，同时包含α
‑
二羰基化合物的实际样品基质成分往往较为复杂，最终造成无法对其进行精准检测。因此，α
‑
二羰基化合物需要经前处理方可进行分析，通过借助一些化合物对α
‑
二羰基化合物进行衍生化，从而改善该类物质的色谱保留、增加光学基团，实现对其的分离、定性及定量。
[0004]传统的α
‑
二羰基化合物衍生剂多为邻二胺化合物，其中邻苯二胺最为普遍。邻苯二胺具有衍生快、产生发色团、廉价易得等优点，在色谱方法柱前衍生上应用较广。但是，其本身难以保存，在室温下不稳定，易氧化为吩嗪，并且还具有一定的生物毒性，会造成对皮肤、黏膜等的腐蚀。
[0005]含胍基反应基团的精氨酸也是一种传统的α
‑
二羰基化合物衍生剂，其优势在于生物毒性小、选择性佳，适用于基质复杂的样品的测定。然而，精氨酸极性较大，色谱保留差。
[0006]还有的传统α
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二羰基化合物衍生剂对α
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二羰基化合物进行衍生化反应后应用于色谱质谱联用分析中，会出现灵敏度低的问题，这是因为α
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二羰基类化合物不同的物质间分子量差异大，长链α
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二羰基化合物保留己糖C6的结构，但是短链α
‑
二羰基化合物结构简单、分子量小，导致二者在挥发性方面存在较大差别。

技术实现思路

[0007]基于此，本专利技术提供了一种α
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二羰基化合物的检测方法，所采用的试剂与衍生化物的性质均稳定，灵敏度高，检测范围广，且重复性与专一性均较好。
[0008]本专利技术通过如下技术方案实现。
[0009]一种α
‑
二羰基化合物的检测方法，包括如下步骤：
[0010]将2
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胍基苯并咪唑与溶剂混合，制备衍生化试剂；
[0011]将待测样品与所述衍生化试剂混合，进行衍生化反应，制备衍生化产物；
[0012]将所述衍生化产物进行液相色谱串联质谱分析；
[0013]其中，所述液相色谱采用的条件包括：流动相A为甲酸水溶液；流动相B为甲醇。
[0014]在其中一个实施例中，衍生化反应的温度为30℃～50℃；和/或
[0015]衍生化反应的时间为6h～12h；和/或
[0016]衍生化反应在pH为7～8的环境中进行。
[0017]在其中一个实施例中，所述液相色谱采用的条件还包括：采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序包括：0min～6min，流动相B的体积百分数为10％；6min～10min，流动相B的体积百分数从10％变化至20％；10min～16min，流动相B的体积百分数从20％变化至90％；16min～24min，流动相B的体积百分数保持为90％；24min～25min，流动相B的体积百分数从90％变化至10％。
[0018]在其中一个实施例中，所述液相色谱采用的条件还包括：流速为0.8mL/min～1.2mL/min；柱温为20℃～25℃；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；和/或
[0019]所述液相色谱采用的色谱柱的尺寸包括：柱长为120mm～130mm，内径为4.4mm～4.8mm，填料粒径为4μm～6μm。
[0020]在其中一个实施例中，所述甲酸水溶液中，甲酸的质量分数为0.08％～0.12％。
[0021]在其中一个实施例中，所述质谱采用的条件包括：离子化方式为电喷雾电离；雾化气流速为2L/min～4L/min；干燥气流速为8L/min～12L/min；脱溶剂管温度为220℃～280℃；加热模块温度为350℃～450℃；离子源接口电压为3.5kV～4.5kV；扫描模式为多反应监测扫描。
[0022]在其中一个实施例中，所述溶剂选自甲醇与水中的一种或两种。
[0023]在其中一个实施例中，所述α
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二羰基化合物选自乙二醛、甲基乙二醛、2,3
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丁二酮、D
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葡糖醛酮、2
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氯代
‑2‑
苯基乙醛与1
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苯基
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1,2
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丙二酮中的一种或几种。
[0024]在其中一个实施例中，所述待测样品的来源选自中药材、生物组织与食品中的一种或几种。
[0025]本专利技术还提供一种如上所述的α
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二羰基化合物的检测方法在检测中药材、生物组织与食品中α
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二羰基化合物中的应用。
[0026]与现有技术相比较，本专利技术的α
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二羰基化合物的检测方法具有如下有益效果：
[0027]本专利技术人选用2
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胍基苯并咪唑作为α
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二羰基化合物的衍生试剂，并将衍生化后的产物进行液相色谱串联质谱分析，建立了一个以2
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胍基苯并咪唑为质谱增敏探针的α
‑
二羰基化合物衍生方法。2
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胍基苯并咪唑作为电子供体，易进攻α
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二羰基结构，从而形成结构较稳定的五元环，最终实现衍生化目的，提高离子化效率与质谱响应，能够获得较好的灵敏度，具体体现为短链α
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二羰基化合物的检测灵敏度提高15
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65倍。同时本专利技术的α
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二羰基化合物的检测方法检测范围广，能够同时满足长链和短链的α
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二羰基化合物的检测，并且重复性好，准确性高，专一性与选择性也较好。
附图说明
[0028]图1为本专利技术提供的不同衍生化温度效果考察对比图；
[0029]图2为本专利技术提供的不同衍生化温度下未脱水与脱水产物对比图；
[0030]图3为本专利技术提供的不同衍生化时间效果考察对比图；
[0031]图4为本专利技术提供的不同衍生化pH效果考察对比图；
[0032]图5为本专利技术提供的不同色谱柱效果考察对比图；
[0033]图6为本专利技术提供的2
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GBI
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GO的二级质谱裂解图；
[0034]图7为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种α
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二羰基化合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将2
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胍基苯并咪唑与溶剂混合，制备衍生化试剂；将待测样品与所述衍生化试剂混合，进行衍生化反应，制备衍生化产物；将所述衍生化产物进行液相色谱串联质谱分析；其中，所述液相色谱采用的条件包括：流动相A为甲酸水溶液；流动相B为甲醇。2.根据权利要求1所述的α
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二羰基化合物的检测方法，其特征在于，衍生化反应的温度为35℃～45℃；和/或衍生化反应的时间为6h～12h；和/或衍生化反应在pH为7～8的环境中进行。3.根据权利要求1所述的α
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二羰基化合物的检测方法，其特征在于，所述液相色谱采用的条件还包括：采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序包括：0min～6min，流动相B的体积百分数为10％；6min～10min，流动相B的体积百分数从10％变化至20％；10min～16min，流动相B的体积百分数从20％变化至90％；16min～24min，流动相B的体积百分数保持为90％；24min～25min，流动相B的体积百分数从90％变化至10％。4.根据权利要求1所述的α
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二羰基化合物的检测方法，其特征在于，所述液相色谱采用的条件还包括：流速为0.8mL/min～1.2mL/min；柱温为20℃～25℃；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；和/或所述液相色谱采用的色谱柱的尺寸包括：柱长为120mm～130mm，内径为4.4mm～4.8mm，填料粒径为4μm～6μm。5.根据权利要求1所述的α
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭宾，刘雅璇，丑芳，黄礼斌，方静，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：