间充质干细胞的储存或运输制剂及其制备和使用方法技术

本发明专利技术涉及一种间充质干细胞储存或运输制剂，一种制备所述间充质干细胞储存或运输制剂的方法以及使用所述间充质干细胞储存或运输制剂的方法。此类方法包括在该储存或运输制剂中运输间充质干细胞的方法以及治疗患有疾病的受试者的方法，所述方法包括局部施用已在该储存或运输制剂中储存或运输的间充质干细胞。还涉及间充质干细胞的单位剂量。胞。还涉及间充质干细胞的单位剂量。胞。还涉及间充质干细胞的单位剂量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】间充质干细胞的储存或运输制剂及其制备和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年10月8日提交的第62/912,368号提美国临时申请的优先权的权益，其内容通过引用整体并入本文以用于所有目的。
[0003]序列表
[0004]本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过引用并入本文。


[0005]本专利技术涉及一种间充质干细胞储存或运输制剂，一种制备所述间充质干细胞储存或运输制剂的方法以及使用所述间充质干细胞储存或运输制剂的方法。此类方法包括在该储存或运输制剂中运输间充质干细胞的方法以及治疗患有疾病的受试者的方法，所述方法包括局部施用已在该储存或运输制剂中储存或运输的间充质干细胞。还涉及间充质干细胞的单位剂量。

技术介绍

[0006]从脐带羊膜分离的间充质干细胞及其伤口愈合特性已经在美国专利申请2006/0078993(导致授权的美国专利9,085,755、9,737,568和9,844,571)和相应的国际专利申请WO2006/019357中首次报道。从那时起，脐带组织作为多能细胞的来源而受到关注；由于其广泛的可用性，脐带和特别是从脐带羊膜分离的干细胞(也称为“脐带衬干细胞”)被认为是再生医学细胞的极好的替代来源。参见，Jeschke等人，Umbilical Cord Lining Membrane and Wharton
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s Jelly
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Derived Mesenchymal Stem Cells:the Similarities and Differences；The Open Tissue Engineering and Regenerative Medicine Journal,2011,4,21
‑
27。同时，在美国申请20181/27721或相应的国际申请WO2018/067071中描述了来自脐带羊膜的这种间充质干细胞群体。
[0007]在美国申请2018/127721或相应的国际申请WO2018/067071中描述的间充质干细胞群体具有的优点是该群体的干细胞中99％或更多表达三种MSC标志物CD73、CD90和CD105，而缺乏CD34、CD45和HLA
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DR的表达。因此，这种非常同质且明确的细胞群体是临床试验和基于细胞的疗法的理想候选者，因为其例如完全满足例如以下所定义的用于细胞疗法的人MSC通常接受的标准：Dominii等人“用于定义多能间充质基质细胞的最小标准(Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells)。国际细胞治疗协会立场声明(The International Society for Cellular Therapy position statement)”，Cytotherapy(2006)Vol.8,No.4,315
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317，Sensebe等人，“Production of mesenchymal stromal/stem cells according to good manufacturing practices:a,review”,Stem Cell Research&Therapy 2013,4:66)，Vonk等人，Stem Cell Research&Therapy(2015)6:94，或Kundrotas Acta Medica Littuanica.2012.Vol.19.No.2.P.75
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79。如国际申请WO2018/067071中所述，该间充质干细胞群体可以，例如，以其未分化状态用于伤口愈合目的，例如烧伤治疗。
[0008]然而，干细胞例如上述间充质干细胞通常不在产生它们的部位施用/给予患者。在收获细胞和进一步利用它们之间通常经过相当长的时间。因此，需要提供在通常用于细胞运输或储存的一段时间内保持细胞存活和健康的储存或运输制剂。
[0009]因此，本专利技术的目的是提供一种满足该需要的适于储存和/或运输间充质干细胞的制剂。

技术实现思路

[0010]该目的通过具有独立权利要求的特征的方法、间充质干细胞储存或运输制剂和单位剂量来实现。
[0011]在第一方面，本专利技术提供了制备间充质干细胞储存或运输制剂的方法，其中所述制剂包含约0.5百万至约10百万个间充质干细胞，所述方法包括
[0012]a)将间充质干细胞悬浮在预定体积的晶体溶液中，其中所述晶体溶液包含约0.5％或约1％至约5％(w/v)的血清白蛋白，从而获得第一细胞悬液，
[0013]b)确定所述第一细胞悬液中的所述间充质干细胞的浓度，以及确定制备包含约0.5百万至约10百万个间充质干细胞的制剂所需的所述第一细胞悬液的体积，
[0014]c)将确定体积的第一细胞悬液与一定体积的液体载体混合，其中所述液体载体包含约0.5％或约1％至约5％(w/v)的血清白蛋白以及
[0015]i)Trolox；
[0016]ii)Na
+
；
[0017]iii)K
+
；
[0018]iv)Ca
2+
；
[0019]v)Mg
2+
；
[0020]vi)Cl
‑
；
[0021]vii)H2PO4‑
；
[0022]viii)HEPES；
[0023]ix)乳糖醛酸盐；
[0024]x)蔗糖；
[0025]xi)甘露醇；
[0026]xii)葡萄糖；
[0027]xiii)葡聚糖
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40；
[0028]xiv)腺苷，和
[0029]xv)谷胱甘肽，
[0030]从而获得包含约0.5百万至约10百万个间充质干细胞的间充质干细胞储存或运输制剂。
[0031]在第二方面，本专利技术提供了通过如本文所定义的方法获得的间充质干细胞储存或运输制剂。
[0032]在第三方面，本专利技术提供了可通过如本文所定义的方法获得的间充质干细胞储存或运输制剂。
[0033]在第四方面，本专利技术提供了运输间充质干细胞的方法，所述方法包括在如本文所
定义的间充质干细胞储存或运输制剂中运输所述间充质干细胞。
[0034]在第五方面，本专利技术提供了治疗患有疾病的受试者的方法，所述方法包括局部施用已经在如本文所定义的间充质干细胞储存或运输制剂中储存或运输的间充质干细胞。
[0035]在第六方面，本专利技术提供了可通过本文定义的方法获得的单位剂量的间充质干细胞。
附图说明
[0036]当结合非限制性实施例和附图考虑时，参考详细描述将更好地理解本专利技术，其中：
[0037]图1示出了用于Dulbecco改进的Eagle培养基的Lonza的技术信息表，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备间充质干细胞储存或运输制剂的方法，其中所述制剂包含约0.5百万至约10百万个间充质干细胞，所述方法包括：a)将间充质干细胞悬浮在预定体积的晶体溶液中，其中所述晶体溶液包含约0.5％至约5％(w/v)的血清白蛋白，从而获得第一细胞悬液，b)确定所述第一细胞悬液中的所述间充质干细胞的浓度，以及确定制备包含约0.5百万至约10百万个间充质干细胞的制剂所需的所述第一细胞悬液的体积，c)将确定体积的第一细胞悬液与一定体积的液体载体混合，其中所述液体载体包含约0.5％至约5％(w/v)的血清白蛋白以及i)Trolox；ii)Na
+
；iii)K
+
；iv)Ca
2+
；v)Mg
2+
；vi)Cl
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；vii)H2PO4‑
；viii)HEPES；ix)乳糖醛酸盐；x)蔗糖；xi)甘露醇；xii)葡萄糖；xiii)葡聚糖
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40；xiv)腺苷，和xv)谷胱甘肽，从而获得包含约0.5百万至约10百万个间充质干细胞的所述间充质干细胞储存或运输制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中，用于悬浮所述间充质干细胞的所述晶体溶液的预定体积为约1ml至约10ml。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在将所述确定体积的第一细胞悬液与所述体积的液体载体混合后，所述间充质干细胞储存或运输制剂的总体积为约1ml。4.根据权利要求2所述的方法，其中所述制剂包含约0.5百万至约10百万个活的间充质干细胞。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述制剂包含约1百万、约3百万或约5百万个间充质干细胞。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在将所述间充质干细胞重新悬浮在所述预定体积的晶体溶液中之前，已经从细胞培养容器中收获所述间充质干细胞。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述的晶体溶液和液体载体均含有相同浓度的血清白蛋白。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述的晶体溶液和液体载体均含有约0.5％至约5％(w/v)的血清白蛋白。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述的晶体溶液和液体载体均含有约1％至约5％(w/v)的血清白蛋白。10.根据权利要求7
‑
9中任一项所述的方法，其中所述的晶体溶液和液体载体均含有约1％至约3％(w/v)的血清白蛋白。11.根据权利要求7
‑
10中任一项所述的方法，其中所述的晶体溶液和液体载体均含有约1％(w/v)的血清白蛋白。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述血清白蛋白是人血清白蛋白。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述晶体溶液包含钠、钾、镁和氯化物。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述晶体溶液是PlasmaLyte或Ringer
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s乳酸盐。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述间充质干细胞储存或运输制剂包含不超过20％的PlasmaLyte。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述间充质干细胞是选自以下的间充质干细胞：脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带
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胎盘连接处的间充质干细胞、脐带血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和脂肪组织来源的间充质干细胞。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述脐带间充质干细胞选自羊膜间充质干细胞、血管周围间充质干细胞、Wharton
’
s胶质间充质干细胞、脐带羊膜间充质干细胞。18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述脐带羊膜间充质干细胞是间充质干细胞群体，其中所述间充质干细胞群体的至少约90％或更多细胞表达下列标志物中的每一种：CD73、CD90和CD105。19.根据权利要求18所述的方法，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：科罗拉多大学董事会，法人，
类型：发明
国别省市：