一种基于CRISPRCas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR Cas13d基因编辑蛋白检测急性心肌梗死标志物cTnI(心肌肌钙蛋白I)的方法。样品先于酶标板上孵育形成抗体

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法


[0001]本专利技术属于生物检测技术，特别涉及CRISPR Cas13d基因编辑蛋白体外检测心肌肌钙蛋白I的一种荧光检测方法。

技术介绍

[0002]急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)是一种临床常见的心脏疾病，病因是心肌缺血性坏死造成急性冠状动脉闭塞和血流中断。因其较高的致死率和危害性，AMI的准确诊断具有相当重要的临床价值。目前监测AMI的特异性心肌标志物有肌红蛋白(MYO)、肌酸激酶同工酶(CK
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MB)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)。其中cTnI的心肌特异性最优，且在AMI发生后，心肌组织中的心肌肌钙蛋白I(cTnI)被迅速的释放到血液中并能保持5
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10天的时间窗口，因而可作为心脏损伤前筛查，也是AMI诊断最有效的途径之一。通常认为cTnI在血液中的浓度大于0.5ng/ml时出现心肌损伤，AMI患者血液cTnI通常在1
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25ng/ml的范围内。
[0003]目前的cTnI本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)基于标记有cTnI抗体的酶标板，结合待测物中的cTnI，孵育形成抗体
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cTnI复合物；(2)两条ssDNA退火形成双链cTnI DNA适配体；(3)适配体与cTnI
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抗体复合物孵育，结合形成抗体
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cTnI
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适配体三元夹心结构；(4)抗体
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cTnI
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适配体三元夹心结构与T7 RNA聚合酶Mix混合，通过识别双链DNA适配体的T7启动子序列启动转录合成激活子RNA；(5)CRISPR Cas13d蛋白与crRNA按比例混合，锚定形成Cas
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crRNA核糖核酸复合物；(6)向步骤(4)的产物中加入核糖核酸复合物和荧光信号报告分子，Cas
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crRNA核糖核酸复合物可特异性识别激活子RNA，激活Cas蛋白的侧切活性并切割荧光报告分子，检测相关动力学和终点荧光值。2.根据权利要求1所述的基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：crRNA
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F：TAATACGACTCACTATAGGCACTGGTGCAASEQ ID NO.1ATTTGCACTAGTCTAAAACTCCATGATTTCCTCCGCGATCATTcrRNA<...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯致远，张晶晶，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：