一种提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于微生物领域，涉及一种提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂及其制备方法，该复合微生态菌剂由四种组分组成，具高抗菌活性的贝莱斯芽孢杆菌、具高抗菌活性的乳酸乳球菌、3味中草药浸出液及β

A compound microbial agent for improving the immunity of aquatic animals and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于微生物领域，涉及一种水产养殖用复合微生态菌剂，特别涉及一种用于提高水产动物免疫力的微生态菌剂。

技术介绍

[0002]我国是世界上的渔业大国，水产养殖产量雄居世界首位，我们不仅要保证水产品的生产量，更要注重水产品的质量。据不完全统计，全国水产养殖因病害损失达15
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20％，损失量高达450
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600万吨。因此，水产养殖病原菌拮抗微生物的筛选及益生菌剂生产应用，对于水生动物疾病防治和减少或不用抗生素具有关键的作用。益生菌剂的研制为水产养殖业朝着绿色健康养殖的方向发展提供了重要手段，为解决当前水产养殖生产中病害大量传播、抗生素肆意滥用、养殖环境恶化、病原耐药性加强、水产养殖动物药物残留、食品安全等系列问题具有重要意义，充分显示了利用微生态防治技术的优越性。
[0003]为解决好水产养殖业绿色发展面临的突出问题，有效控制由病原细菌引起的疾病的发生与流行，复合益生菌剂的研发对我国水产养殖业绿色发展具有重大而深远的意义。因此，开发研制水产养殖用复合微生态菌剂，从通过调节养殖水体的微生态平衡，实现通过微生物生态环境调节，控制环境中病原生物量，降低宿主应激反应及增强宿主抵抗力，同时净化水质，提高水产动物免疫力与抗病能力等技术手段，控制病害发生，降低发病率，减少死亡率，保护水环境，保障水产品质量安全，为水产养殖业健康可持续发展具有重要的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种提高水产动物抗病力、降低水产养殖生产中由病原细菌所造成的危害、以满足水产养殖生产上的抗病需求的复合微生态菌剂。
[0005]本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的：
[0006]一种提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，所述菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌CPA1
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1、乳酸乳球菌JMD3
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5、中草药浸出液和β
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环糊精。
[0007]进一步的，贝莱斯芽孢杆菌和乳酸乳球菌的比例为2:1。
[0008]进一步的，所述中草药包括五倍子、女贞子和甘草。
[0009]进一步的，五倍子、女贞子和甘草的比例为3:1:1。
[0010]进一步的，所述中草药浸出液的制备方法为：将中草药加入蒸馏水，置水浴煮沸30min后固液分离；再于中草药中加入蒸馏水，二次同样水浴30min后固液分离，将两次分离的液体混合。
[0011]本专利技术还提供上述提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂的制备方法，分别将贝莱斯芽孢杆菌和乳酸乳球菌种子菌液接种在LB液体培养基中，在37℃、120r/min条件下进行扩大培养并调节至贝莱斯芽孢杆菌、乳酸乳球菌的浓度为10
13
CFU/mL，将经过扩大培养的
贝莱斯芽孢杆菌和乳酸乳球菌菌液按照体积比2:1混合制成混合菌液，离心获得菌体；菌体用中草药浸出液稀释2倍，以5～8％的比例加入β
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环糊精，喷雾干燥制得中草药与复合益生菌喷雾干粉。
[0012]进一步的，喷雾干燥时喷口温度设置为140℃。
[0013]本专利技术还提供上述菌剂在水体中抗非O1霍乱弧菌、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、维氏气单胞菌、副溶血弧菌中的应用。
[0014]本专利技术还提供上述菌剂在水产动物饲料添加剂中的应用，按5～10％的比例添加在水产动物饲料中。
[0015]进一步的，所述水产动物为河蟹和青虾。
[0016]本专利技术是一种提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，其特点是：它由以下四种成分组成，
[0017](1)具高抗菌活性的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CPA1
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1；
[0018](2)具高抗菌活性的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)JMD3
‑
5；
[0019](3)3味中草药浸出液；
[0020](4)β
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环糊精；
[0021]根据权利要求1所述的具高抗菌活性的贝莱斯芽孢杆菌CPA1
‑
1，其特征在于，其具体制备步骤如下：
[0022]采集健康青虾，用无菌生理盐水冲洗多次，再用75％的酒精擦拭虾体表面，在无菌条件下，取青虾的肝胰腺、肌肉横切面划线于普通的营养琼脂平板上，28℃培养24h，肉眼观察菌落形态、大小、颜色等，挑取不同形态单菌落，采用点种法对分离菌进行初筛，以非01霍乱弧菌、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、维氏气单胞菌、副溶血弧菌作为指示菌进行复筛，筛选出抑菌圈大、抑菌普广、对多种病原细菌具有较强拮抗效果的菌株CPA1
‑
1，通过形态学、生理生化特征以及16SrRNA和gyrB序列分析，筛选出功能菌株贝莱斯芽孢杆菌CPA1
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1。用LB液体培养基发酵获得菌体。
[0023]根据权利要求1所述的具高抗菌活性的乳酸乳球菌JMD3
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5，其特征在于，其具体制备步骤如下：
[0024]采集养殖青虾，用无菌生理盐水冲洗多次，无菌操作研磨制备成虾体组织悬液，灭菌生理盐水稀释，取虾体组织悬液及养殖池水样于MRS平板上划线分离；通过对非O1霍乱弧菌、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、维氏气单胞菌、副溶血弧菌等6种指示菌拮抗作用测定、形态学、生理生化特征以及16SrRNA序列分析，筛选出功能菌株乳酸乳球菌JMD3
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5。用MRS液体培养基发酵获得菌体。
[0025]根据权利要求1所述的3味中草药浸出液，其特征在于，其具体制备步骤如下：对病原非O1霍乱弧菌XL1(最小杀菌浓度为2.0mg/mL)、嗜水气单胞菌G3、类志贺邻单胞菌SN1、弗氏柠檬酸杆菌LJ1、维氏气单胞菌GYC1、副溶血弧菌JGB080708
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1具有抑菌作用的五倍子，具有增强免疫作用的女贞子，具有解毒作用的甘草。3味中草药比例为3:1:1，加入蒸馏水，置水浴煮沸30min，取出(挤压)上清液存放。再于中草药中加入蒸馏水，二次同样水浴30min后取出(挤压)上清液。两次的上清液混合、并补足蒸馏水，3味中草药终浓度为0.2g/mL，作为3味中草药浸出液。
[0026]本专利技术还提供了提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，其特征在于，所述菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌、乳酸乳球菌、中草药浸出液和β
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环糊精。2.根据权利要求1所述的提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，其特征在于，贝莱斯芽孢杆菌和乳酸乳球菌的比例为2:1。3.根据权利要求1所述的提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，其特征在于，所述中草药包括五倍子、女贞子和甘草。4.根据权利要求3所述的提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，其特征在于，五倍子、女贞子和甘草的比例为3:1:1。5.根据权利要求1所述的提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂，其特征在于，所述中草药浸出液的制备方法为：将中草药加入蒸馏水，置水浴煮沸30min后固液分离；再于中草药中加入蒸馏水，二次同样水浴30min后固液分离，将两次分离的液体混合。6.根据权利要求1所述的提高水产动物免疫力的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于，分别将贝莱斯芽孢杆菌和乳酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：高晓建，朱鑫海，张晓君，姜群，钱且奇，张紫瑞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：