肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶，本发明专利技术从肺炎克雷伯菌噬菌体DP上克隆得到该裂解酶编码基因，采用原核表达方式，诱导表达可溶解的裂解酶，所得裂解酶重组蛋白可以在无外膜渗透剂的情况下穿过革兰氏阴性菌的细胞外膜，水解细菌细胞壁肽聚糖层，对革兰氏阴性菌例如铜绿假单胞菌和大肠杆菌表现出强烈的抑菌活性，可用于制备抗革兰氏阴性菌的药物，为治疗和抑制革兰氏阴性菌疾病提供有力支持；此外，该裂解酶的制备方法简单，适于工业化大规模生产。适于工业化大规模生产。适于工业化大规模生产。

Klebsiella pneumoniae phage lyase and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，涉及一种肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶，其制备方法，以及在制备药物中的应用。

技术介绍

[0002]噬菌体裂解酶是双链DNA噬菌体所特有的，在病毒复制晚期合成的一类细胞壁水解酶。其能通过穿孔素在细胞膜形成的孔洞，抵达细胞壁上的肽聚糖靶点，对肽聚糖中的重要化学键进行切割水解，最终导致细菌裂解、死亡。噬菌体裂解酶可以选择性地快速杀灭特定的细菌，且不易产生抗性，不破坏机体的正常菌群，是“精准型”抗菌物质。
[0003]针对革兰氏阳性菌的裂解酶研究已经取得较满意的进展，而针对革兰氏阴性菌的裂解酶研究仍面临着较大的难题。主要原因在于，革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层外面包裹的外膜阻碍了裂解酶与肽聚糖的接触。该难题有望通过以下途径克服或解决：(1)鉴定识别能穿透外膜的天然裂解酶；(2)将裂解酶与外膜渗透剂如EDTA、柠檬酸、苹果酸和阳离子多肽、抑菌剂等协同作用；(3)将裂解酶与一段能渗透外膜的多肽进行融合表达等。

技术实现思路

[0004]着眼于上述问题，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.权利要求1所述肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶的编码基因。3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组表达载体。5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：是将核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶编码基因克隆入原核表达载体pⅡSA的zSUMO标签序列与eGFP标签序列之间而得到。6.含有权利要求4或5所述重组表达载体的工程菌。7.如权利要求6所述的工程菌，其特征在于，是将所述重组表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中而得到。8.利用权利要求7所述工程菌制备肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述工程菌接种于含有氨苄青霉素即Amp的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜，次日取菌悬液按体积比1:100接入...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨虹林，付志锋，卢曙光，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：