鹿茸多肽CNT14在制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了鹿茸多肽CNT14在制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物中的应用，研究发现，鹿茸多肽CNT14体外能明显促进口腔黏膜角质化细胞和口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移，在体内能明显促进兔口腔黏膜创伤的愈合；本发明专利技术不仅扩宽了鹿茸多肽CNT14的应用范围，而且为临床上促进口腔黏膜创伤愈合提供了新的候选药物。上促进口腔黏膜创伤愈合提供了新的候选药物。上促进口腔黏膜创伤愈合提供了新的候选药物。

Application of antler polypeptide cnt14 in the preparation of drugs to promote wound healing of oral mucosa

【技术实现步骤摘要】
鹿茸多肽CNT14在制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物中的应用


[0001]本专利技术属于活性多肽的应用
，特别涉及鹿茸多肽CNT14在制药方面的应用。

技术介绍

[0002]临床上因为感染、外伤、牙周病、自身免疫系统疾病等因素会造成口腔黏膜创伤，影响人们的美观以及吞咽、咀嚼等功能。口腔作为一个复杂的有菌环境，若损伤后不能有效愈合会导致创口暴露，进而增加创口被感染的风险，因此，口腔黏膜创伤的高质量的愈合是口腔内各种外科技术成功的前提。目前临床上针对口腔黏膜创伤造成的软组织缺损，最常用的方法多以自体软组织移植为主，但这会导致二次创伤，增加患者的痛苦，且不能很好地恢复原有的解剖形状。因此，寻找能够促进口腔黏膜创伤愈合的有效技术手段成为临床的迫切需要。
[0003]鹿茸是梅花鹿或马鹿雄鹿未骨化带有茸毛的鹿角，自古以来被用于我国的中药领域，至今已有两千多年的使用时间。鹿茸多肽(pilose antler polypeptides，PAP)是鹿茸的主要活性成分之一，近年来发现其具有抑制肿瘤细胞、改善记忆障碍、促进神经系统组织再生、心肌保护和免疫增强等药理作用。有研究者从梅花鹿茸中分离得到了一个单体多肽CNT14，氨基酸序列为EPTVLDEVCLAHGP。生物活性研究结果表明，该多肽可明显促进小鼠海马神经细胞生长，预示其可能在抗衰老药物方面具有一定前景；同时，该多肽对表皮细胞、肋软骨细胞、脾细胞均具有增殖作用，推断其可能是一种细胞生长因子。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于考察鹿茸多肽CNT14对口腔黏膜创伤愈合的影响，以开发其在制药方面的新用途。
[0005]本专利技术的生物活性研究结果显示，鹿茸多肽CNT14体外能明显促进口腔黏膜角质化细胞和口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移；体内能明显促进兔口腔黏膜创伤的愈合；表明鹿茸多肽CNT14可以用于制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物。
[0006]为此，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]鹿茸多肽CNT14在制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物中的应用。
[0008]进一步，所述促进口腔黏膜创伤愈合的药物为促进口腔黏膜角质化细胞和口腔黏膜成纤维细胞增殖和迁移的药物。
[0009]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了鹿茸多肽CNT14在制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物中的应用，不仅扩宽了鹿茸多肽CNT14的应用范围，而且为临床上促进口腔黏膜创伤愈合提供了新的候选药物。
附图说明
[0010]图1为鹿茸多肽CNT14刺激正常人口腔黏膜成纤维细胞hOMF后细胞增殖柱状图。
[0011]图2为鹿茸多肽CNT14刺激正常人口腔黏膜角质化细胞hOK后细胞增殖柱状图。
[0012]图3为50μg/ml鹿茸多肽CNT14刺激hOK细胞后划痕实验结果图。
[0013]图4为50μg/ml鹿茸多肽CNT14刺激hOMF细胞后划痕实验结果图。
[0014]图5为鹿茸多肽CNT14刺激hOK细胞后划痕实验结果的柱状分析图。
[0015]图6为鹿茸多肽CNT14刺激hOMF细胞后划痕实验结果的柱状分析图。
[0016]图7为平行对照实验鹿茸多肽CNT14促进日本大耳兔口腔黏膜创伤愈合的结果图。
[0017]图8为自身对照实验鹿茸多肽CNT14促进日本大耳兔口腔黏膜创伤愈合的结果图。
[0018]图9为平行对照实验鹿茸多肽CNT14对日本大耳兔口腔黏膜创伤愈合率影响的折线图。
[0019]图10为自身对照实验鹿茸多肽CNT14对日本大耳兔口腔黏膜创伤愈合率影响的折线图。
具体实施方式
[0020]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。
[0021]本专利技术实施例使用的鹿茸多肽CNT14(氨基酸序列为EPTVLDEVCLAHGP)购买于南京杰肽生物科技有限公司；正常人口腔黏膜成纤维细胞hOMF(Normal Human Oral Mucosa(P3)500K fibroblast cells)和正常人口腔黏膜角质化细胞hOK(Normal Human Oral Mucosa(P2)500K Keratinocytes cells)均购买于新加坡CellResearch Corp；实验动物日本大耳兔购买于昆明医科大学实验动物学部。
[0022]一、鹿茸多肽CNT14对口腔黏膜角质化细胞与口腔黏膜成纤维细胞增殖的影响
[0023]采用CCK
‑
8法检测鹿茸多肽CNT14对hOMF、hOK细胞增殖的影响。取对数生长期的hOMF和hOK分别接种于96孔板，置培养箱中于37℃、5％CO2条件下预培养24h，加入100μg/ml鹿茸多肽CNT14水溶液至CNT14终浓度分别为10、20、50、80、100μg/ml，同时设置对照孔和空白孔，处理不同时间(12、24、48h)后，加入CCK
‑
8试剂，室温孵育2h，用酶标仪在450nm处检测细胞吸光度值。
[0024]鹿茸多肽CNT14刺激hOMF后细胞增殖柱状图如图1所示，50μg/ml鹿茸多肽CNT14处理24h，可显著促进hOMF细胞的增殖；10μg/ml、50μg/ml和80μg/ml鹿茸多肽CNT14处理48h，均可见hOMF细胞增殖明显；说明鹿茸多肽CNT14处理可促进hOMF细胞的增殖。
[0025]鹿茸多肽CNT14刺激hOK后细胞增殖柱状图如图2所示，20μg/ml和50μg/ml鹿茸多肽CNT14处理24h，可显著促进hOK细胞的增殖；10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、80μg/ml和100μg/ml的鹿茸多肽CNT14处理48h，均可见hOK细胞增殖明显，尤其50μg/ml和80μg/ml组，作用极显著；说明鹿茸多肽CNT14可促进hOK细胞的增殖。
[0026]二、鹿茸多肽CNT14对口腔黏膜角质化细胞与口腔黏膜成纤维细胞迁移的影响
[0027]采用划痕实验检测鹿茸多肽CNT14对hOMF、hOK细胞迁移的影响。取对数生长期的hOMF和hOK细胞分别接种于6孔板，待细胞铺满后划线，尽量垂直于背后的横线划痕，划下的细胞用PBS冲洗3次，加入100μg/ml鹿茸多肽CNT14水溶液至CNT14终浓度分别为10、20、50、
80、100μg/ml，同时设置对照孔，将细胞置培养箱中于37℃、5％CO2条件下培养，hOK细胞分别于0、12、24、48h取样，hOMF细胞分别于0、24、48、72h取样，拍照。
[0028]50μg/ml鹿茸多肽CNT14刺激hOK细胞后划痕实验结果图如图3所示，可见50μg/ml鹿茸多肽CNT14处理可以促进hOK细胞的迁移。鹿茸多肽CNT14刺激hOK细胞后划痕实验结果的柱状分析图如图5所示，10μg/ml、20μg/ml和50μg/ml的鹿茸多肽CNT14处理24h，hOK细胞的迁移率明显升高；10μg/ml、20μg/ml、50μ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鹿茸多肽CNT14在制备促进口腔黏膜创伤愈合的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李自良，纳飞，周建忠，
申请(专利权)人：昆明医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：