Hypo-ABs在促进超长随意皮瓣存活中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Hypo

Application of hypo ABS in promoting the survival of super long random flap

【技术实现步骤摘要】
Hypo
‑
ABs在促进超长随意皮瓣存活中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药，具体为Hypo
‑
ABs在促进超长随意皮瓣存活中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，随意皮瓣是常见的修复性皮瓣，常用于修复因各种原因(如创伤、先天性疾病、癌症切除、糖尿病)而引起的皮肤缺损。但是在随意皮瓣的长宽比超过1.5∶1的时候，其远端血液供应不良使其出现不同程度的坏死，这对随意皮瓣在临床的应用带来很大的限制。
[0003]Hypoxic apoptotic bodies(Hypo
‑
ABs)是低氧赋能具有抗缺血缺氧坏死能力的细胞外囊泡。在原有ABs的基础上，诱导凋亡之前给予低氧赋能，使母细胞大量表达抗缺氧的基因，随后给予星形孢菌素(Staurosporine，STS)诱导细胞凋亡产生ABs，在经过差速离心后分离提纯该Hypo
‑
ABs。这种低氧赋能的ABs在原来的基础上包含了更多的抗缺氧能力，具有更好的在缺血缺氧的环境中促进组织细胞存活。但是目前关于Hypo
‑
Abs是否能应用在促进超长随意皮瓣存活中的应用还尚未有研究。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于促进超长随意皮瓣存活。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：Hypo
‑
ABs在促进超长随意皮瓣成活中的应用。
[0006]其中，应用过程中在皮瓣掀起后原位采用1mg/ml浓度的Hypo
‑
Abs注射给药。
[0007]其中，给药方法为皮瓣掀起后使用显微注射针在原位平均注射六个位点。
[0008]其中，药物配置为用BCA法测得的Hypo
‑
ABs的浓度，用PBS稀释为1mg/ml的浓度。
[0009]其中，包括Hypo
‑
ABs在促进超长随意皮瓣成活中对减少水肿的作用。
[0010]其中，包括Hypo
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ABs在促进超长随意皮瓣成活中对血流改善的作用。
[0011]其中，包括Hypo
‑
ABs在促进超长随意皮瓣成活中对血管新生的作用。
[0012]其中，Hypo
‑
Abs的获取方法为：由上皮结缔组织细胞在无糖培养基，充满氮气的培养箱中低氧培养24h后，给予星状孢子菌素(STS)0.5μM刺激12h后，使用差速离心法300g*5mins去除细胞碎片残留，2000g*30mins去除上清，沉淀用PBS重悬获得。
[0013]其中，获得的Hypo
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Abs储藏环境为
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80摄氏度。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]1.低氧赋能的ABs有明显抗缺氧效果。
[0016]2.对随意皮瓣的成活具有明显效果。
[0017]3.对随意皮瓣的成活过程中的消除水肿具有较好效果。
[0018]4.对随意皮瓣的成活过程中的血流量改善具有明显作用。
[0019]5.对随意皮瓣的成活过程中的微血管生成具有明显作用。
附图说明
[0020]图1为Hypo
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ABs的扫描电镜图；
[0021]图2为Hypo
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ABs标记物鉴定；
[0022]图3为术后3天及7天PBS组、Hypo
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ABs治疗组皮瓣存活面积对比图；
[0023]图4为术后7天PBS组、Hypo
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ABs治疗组皮瓣水肿程度对比图；
[0024]图5为术后7天PBS组、Hypo
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ABs治疗组皮瓣血流灌注量对比图；
[0025]图6为PBS组、Hypo
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ABs治疗组皮瓣微血管数量对比图。
具体实施方式
[0026]下面将结合附图所给出的实施例对本专利技术做进一步的详述。
[0027]参照图1
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6所示，
[0028]Hypo
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ABs低氧赋能及刺激诱导产生，差速离心分离提纯
[0029]选用皮下结缔组织细胞系L
‑
wnt3A，在10％胎牛血清DMEM低糖培养基，1％O2、94％N2和5％CO2的氧气控制培养箱中培养24h后，给予星形孢菌素(STS)0.5μM刺激12h，使用差速离心法300g*5mins去除细胞碎片残留，2000g*30mins去除上清，沉淀用PBS重悬，4℃尽快应用，或
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80℃长期储存。
[0030]扫描电镜
[0031]离心收集Hypo
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ABs弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液并将细胞吹打开悬浮于固定液内室温固定2h。固定好的样品经0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次，每次15min。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)配制1％锇酸室温避光固定1
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2h。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次，每次15min。组织依次入30％
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50％
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70％
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80％
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90％
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95％
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100％
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100％酒精每次15min，乙酸异戊酯15min进行脱水。后将样本放入临界点干燥仪内进行干燥。接着将样本紧贴于导电碳膜双面胶上放入离子溅射仪样品台上进行喷金30s左右。最后扫描电子显微镜下观察采图。(见图1)
[0032]Western blotting检测表面标记物
[0033]提取后的的Hypo
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ABs和L
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wnt3A细胞每100ug添加50ulRIPA细胞裂解液+1ulPMSF，冰上裂解30min，后超声裂解强度五，5s*3次，间隔5s。12000转离心30分钟去除沉淀，上清于BCA检测蛋白浓度后按每20ul体积20ug蛋白配至标准量。在下用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离蛋白质，电转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，用5％脱脂牛奶封闭，在4℃过夜用下列抗体检测：H3(1∶1000)，H2B(1∶1000)，C1QC(1∶1000)，C3B(1∶1000)，GAPDH(1∶1000)。二抗孵育2h后，用ECL Plus试剂盒显带。使用Image Lab 3.0软件(Bio
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Rad，Hercules，CA，USA)测量每个条带的强度。(见图1)
[0034]缺血随意皮瓣模型建立
[0035]选用健康的雄性C57BL/6小鼠60只，由温州医科大学实验动物中心提供，清洁级，SCXK[ZJ]2005
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0019，体重20
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30g。将小鼠按照随机数字表发分为2组，PBS对照组30只，Hypo
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Hypo
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ABs在促进超长随意皮瓣成活中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，应用过程中在皮瓣掀起后原位采用1mg/ml浓度的Hypo
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Abs注射给药。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，给药方法为皮瓣掀起后使用显微注射针在原位平均注射六个位点。4.根据权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于，药物配置为用BCA法测得的Hypo
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ABs的浓度，用PBS稀释为1mg/ml的浓度。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括Hypo
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ABs在促进超长随意皮瓣成活中对减少水肿的作用。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括Hypo
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【专利技术属性】
技术研发人员：康杰纳，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：