本发明专利技术公开了一种急性肺损伤恒河猴模型的建立方法，属于动物疾病模型领域。本发明专利技术的方法包括：对恒河猴饲喂80mg/kg的百草枯。本发明专利技术的方法用特定的剂量结合口服方式，可有效建立急性肺损伤恒河猴模型，制作简单，肺损伤明显，各项生化指标以及疾病过程和转归高度类似人急性肺损伤的相应改变，为急性肺损伤治疗手段的开发提供了合适的工具。段的开发提供了合适的工具。段的开发提供了合适的工具。
Establishment of rhesus monkey model of acute lung injury caused by PQ poisoning
【技术实现步骤摘要】
PQ中毒所致急性肺损伤恒河猴模型的建立方法
[0001]本专利技术属于动物疾病模型领域。
技术介绍
[0002]急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是临床常见的危急重症，是由于肺内外致病因素造成弥漫性炎性肺泡浸润、出血、肺水肿和透明膜形成，患者血氧结合能力降低为主的危急症候，严重者发展为急性呼吸窘迫综合征 (acute respiratory distress syndrome，ARDS)。在过去的二十年里，已经开发了几种治疗策略，并取得了显著的进展；然而，死亡率仍然很高，超过三分之一的患者死亡，一些幸存者由于长期低氧而出现脑损伤等并发症。制备稳定的动物模型对观察ALI病理改变和探究潜在药物作用机制和防治并发症等具有重要意义。
[0003]目前的ALI模型制备途径主要分为原发诱导和继发诱导两种。原发诱导通过向气管内滴注脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、盐酸、活的(或热杀死)细菌和病毒等物质直接诱导肺部损伤，而继发诱导则是由其他疾病诱发 ALI包括烧伤、腹腔注射LPS、盲肠结扎穿刺等。
[0004]百草枯(Paraquat，PQ，1,1'
‑
二甲基
‑
4，4
’‑
二氯二吡啶)是一种季胺类高效能除草剂，自1918年专利技术并被用于农业生产以来，PQ中毒一直是发展中国家常见的急诊问题。PQ经消化道、皮肤黏膜及呼吸道等途径进入体内，以损伤肺、脑、肾等器官为主，其中肺损伤是PQ中毒的特征性病变，早期以肺泡上皮细胞变性坏死、炎性细胞浸润、肺泡出血、水肿、肺不张等ALI 表现为特征，重症患者多死于呼吸衰竭或多脏器功能衰竭(multiple organ failure，MOF)，部分患者度过急性期后发生严重肺纤维化。因此，PQ也被用于制备ALI模型。目前ALI最常用模型动物是啮齿类。由于啮齿类在进化关系上与人类相距甚远，以其为研究对象所获得的实验数据对临床指导意义不大。所用到的大动物模型仅限于猪和犬，同样与人存在巨大差异。恒河猴的解剖特点、各系统生理功能及对疾病和治疗药物的反应性与人类极为相近，是进行免疫学相关治疗和干细胞移植临床前有效性和安全性评价的敏感动物；但目前尚未见使用恒河猴作为急性肺损伤模型动物的研究，是否能成功建立恒河猴ALI模型，以及如何建立恒河猴ALI模型尚不能确定。
技术实现思路
[0005]本专利技术要解决的问题是：提供一种PQ中毒所致急性肺损伤恒河猴模型的建立方法。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]百草枯在用于制备急性肺损伤恒河猴模型中的用途，其中，百草枯的施用剂量为75
‑
85mg/kg。
[0008]进一步地，所述施用剂量为80mg/kg。
[0009]进一步地，所述施用为单次口服。
[0010]进一步地，施用前恒河猴禁食一天。
[0011]一种急性肺损伤恒河猴模型的建立方法，包括：对恒河猴施用75
‑
85 mg/kg的百草枯。
[0012]进一步地，所述施用剂量为80mg/kg。
[0013]进一步地，所述施用为单次口服。
[0014]进一步地，施用前恒河猴禁食一天。
[0015]前述方法所制备得到的模型在评价治疗急性肺损伤药物中的用途。
[0016]进一步地，所述药物为干细胞治疗制剂。
[0017]专利技术人通过研究发现，对恒河猴施用百草枯很难制备得到急性肺损伤模型，当施用剂量过低(25或50mg/kg)，则最终使恒河猴产生慢性纤维化表现而非急性肺损伤；当剂量稍高(100mg/kg)，则令恒河猴一天内死亡，没有治疗空窗期。
[0018]本专利技术通过特定浓度的百草枯施用剂量，成功构建得到急性肺损伤恒河猴模型，其在给药后第12
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60h出现典型的急性肺损伤症状，例如肺泡细胞肿胀、细胞层数增加、出血、肺纤维化、炎症细胞浸润、气胸、胸膜病变等。动物模型在此期间存活，提供了足够长的治疗空窗期，可用于各种药物的疗效和安全性评价。
[0019]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0021]图1.PQ中毒急性期恒河猴血液中白细胞、中性粒细胞以及淋巴细胞数量。
[0022]图2.PQ中毒后恒河猴肺穿刺组织的HE、masson、天狼星红染色以及CD68、F4/80和mac387免疫组化检测。
[0023]图3.PQ中毒后急性期肺组织CT扫描结果。
[0024]图4.本专利技术动物模型脏器大体改变。A为肺，有明显出血灶；B(肾)、 C(肾上腺+肾)、D(脾脏)显示其他脏器外观无明显变化。G为固定后肺切面。
[0025]图5.本专利技术动物模型尸检肺组织切片病理染色。HE染色显示在急性期 (12
‑
60h)肺出现明显的肺泡结构改变，有明显出血灶。天狼星红染色显示肺组织出现纤维化。CD68以及F4/80染色显示肺组织出现明显的炎症浸润。
[0026]图6.本专利技术动物模型肝、肾上腺、肾、十二指肠、胃壁、心脏HE染色。
具体实施方式
[0027]实施例1本专利技术动物模型的制备
[0028]1、材料与方法：
[0029]1.1实验材料
[0030]3－4岁雌性和雄性恒河猴3只，无B疱疹病毒、猴逆转录病毒、猴白血病病毒和免疫缺陷病毒感染；购自成都平安动物繁育基地。
[0031]1.2主要试剂
[0032]百草枯，购自上海农药研究所；
[0033]其他药品和耗材均购自华西医院利康药房。
[0034]1.3主要溶液的配制
[0035]溶液的配制：
[0036]取原装1g/支百草枯粉剂，加入1ml生理盐水溶解，作为储存液，4℃短期存放。根据猴体重，按照80mg/kg体重，将PQ溶液掺入猴的食物中。
[0037]1.4主要仪器
[0038]1)全自动生化分析仪。
[0039]2)CT：PHILIPS BRILLIANCE 64排/16排。
[0040]3)石蜡切片机：Leica。
[0041]1.5实验方法
[0042]1.5.1恒河猴肝功能、肾功能生化指标，心肌酶谱，血淀粉酶指标测定
[0043]通过测定上述指标，了解肝、肾、心及胰腺是否存在预存病变，并获得试验前动物基础值。
[0044]1)动物禁食10
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12h，不禁水；
[0045]2)根据动物实际体重，恒河猴通过肌肉内施用Zoletil 50(10mg/kg 体重，Virba本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.百草枯在用于制备急性肺损伤恒河猴模型中的用途，其特征在于：百草枯的施用剂量为75
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85mg/kg。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述施用剂量为80mg/kg。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述施用为单次口服。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：施用前恒河猴禁食一天。5.一种急性肺损伤恒河猴模型的建立方法，其特征在于，包括：对恒河猴施用75
【专利技术属性】
技术研发人员：邵明洋，姚蓉，石毓君，武振汝，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：
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