一种过表达SIRT6重组慢病毒质粒载体及其细胞模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种过表达SIRT6重组慢病毒质粒载体及其细胞模型的构建方法，重组慢病毒质粒载体中SIRT6DNA双链片段的基因SIRT6蛋白质编码区苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；本发明专利技术利用重组慢病毒载体，实现了SIRT6稳定持续性高表达，显著促进内皮细胞的自噬并抑制凋亡，维持了内皮细胞的功能，这为临床上干预内皮细胞功能从而改善心血管疾病带来了新的希望；有助于后续进行更深一步的研究SIRT6与内皮凋亡和自噬之间潜在的分子机制，为治疗由内皮功能障碍所致的心血管疾病提供有用的线索；具有重要的应用价值。要的应用价值。要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
NO:1所示的目的序列，包括下列步骤：
[0009]1)目的基因片段的获取，从人微血管内皮细胞HMEC
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1中提取总RNA，反转录合成cDNA，然后以此为模板，利用扩增SIRT6的特异性引物，所述SIRT6的特异性引物如SEQ ID NO：3所示与如SEQ ID NO：4所示，通过聚合酶链式反应扩增获得目的基因片段，目的基因片段为SIRT6的DNA双链片段；
[0010]2)目的片段和载体连接，将慢病毒载体质粒pHBLV
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CMV
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MCS
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3flag
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EF1
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puro的EcoRI与BamHI之间的DNA小分子替换为步骤1)中SIRT6的DNA双链片段，得到重组慢病毒载体。
[0011]本专利技术还公开了一种SIRT6高表达的人微血管内皮细胞模型的构建方法，包括下列步骤：
[0012]1)将高表达SIRT6重组慢病毒载体质粒联合病毒包装辅助质粒pMD2G与pSPAX2共转染293T细胞，获得病毒上清液；
[0013]2)用步骤1)获得本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种过表达SIRT6重组慢病毒质粒载体，其特征在于：重组慢病毒质粒载体中SIRT6 DNA双链片段的基因SIRT6蛋白质编码区苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.如权利要求1所述的一种过表达SIRT6重组慢病毒质粒载体，其特征在于：SIRT6基因的特异性引物包括正向引物序列如SEQ ID NO：3所示、反向引物序列如SEQ ID NO：4所示。3.一种如权利要求1所述的过表达SIRT6重组慢病毒质粒载体的制备方法，其特征在于，包含SEQ ID NO:1所示的目的序列，包括下列步骤：1)目的基因片段的获取，从人微血管内皮细胞HMEC
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1中提取总RNA，反转录合成cDNA，然后以此为模板，利用扩增SIRT6的特异性引物，所述SIRT6的特异性引物如SEQ ID NO：3所示与如SEQ ID NO：4所示，通过聚合酶链式反应扩增获得目的基因片段，目的基因片段为SIRT6的DNA双链片段；2)目的片段和载体连接，将慢病毒载体质粒pHBLV
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CMV
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MCS
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3flag
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EF1
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puro的EcoRI与BamHI之间的DNA小分子替换为步骤1)中SIRT6的D...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华，郭振杨，葛均波，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：