一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系制造技术

本发明专利技术公开了一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系，包括小干扰RNA与shRNA其中的任意一种，所述小干扰RNA为siRNA1、siRNA2与siRNA3其中的任意一种，本发明专利技术XPB siRNA2与XPB shRNA2能抑制人微血管内皮细胞中XPB的表达；XPB shRNA2能抑制HMEC

【技术实现步骤摘要】
一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系


[0001]本专利技术涉及医学分子生物学和基因工程
，尤其涉及一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系。

技术介绍

[0002]通用转录因子TFIIH(transcription factor IIH)在转录起始和DNA损伤修复发挥着重要的功能，参与细胞周期调控和染色体分离。TFIIH是由10个亚基组成的多蛋白复合物，结构上分为由XPB/ERCC3,XPD/ERCC2，TTDA/p8/GTF2H5,p34/GTF2H3,p44/GTF2H2,p52/GTF2H4和p62/GTF2H1构成的核心亚复合物和由CDK7,Cyclin H和MAT1构成的细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin
‑
dependent
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kinase，CDK)激活激酶(CDK
‑
activating kinase，CAK)亚复合物。人着色性干皮病B组(xeroderma pigmentosum group B，XPB)基因，又称切除修复交叉互补3(e本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于抑制XPB表达物质，其特征在于：包括小干扰RNA与shRNA其中的任意一种，所述小干扰RNA为siRNA1、siRNA2与siRNA3其中的任意一种，所述siRNA1的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述siRNA1的反向核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述siRNA2的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述siRNA2的反向核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述siRNA3的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述siRNA3的反向核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述shRNA的双链模板DNA的正向序列如SEQ ID NO：11所示；述shRNA的双链模板DNA的反向序列如SEQ ID NO：12所示。2.一种用于抑制XPB表达载体，其特征在于：表达载体包括如权利要求1中SEQ ID NO：3
‑
4或SEQ ID NO：11
‑
12所示的序列。3.如权利要求2所述的一种用于抑制XPB表达载体，其特征在于：所述载体为病毒、真菌与细菌表达载体其中的一种。4.一种抑制XPB表达的细胞，其特征在于：细胞为人微血管内皮细胞HMEC
‑
1。5.一种重组慢病毒表达载体的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：1)将SEQ ID NO：11所示的单链DNA分子与SEQ ID NO：12所示的单链DNA分子退火形成带粘性末端的DNA双链片段；2)将慢病毒载体pHBLV
‑
U6
‑
MCS
‑
PGK
‑
NEO通过限制性内切酶1与限制性内切酶2进行酶切，将步骤1)中得到的DNA双链片段通过T4连接酶连入载体，得到重组慢病毒载体。6.一种如权利要求5所述的重组慢病毒载体用于XPB低表达的微血管内皮细胞系的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：1)将重组慢病毒载体联合病毒包装辅助质粒pSPAX2与pMD2G构成三质粒慢...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华，方哲彦，葛均波，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：