一种大豆症青相关病毒侵染性克隆载体与大豆高效接种方法技术

本发明专利技术公开了一种大豆症青相关病毒侵染性克隆载体和大豆高效接种方法，将不少于1.2个串联重复的大豆症青相关病毒全基因组序列构建到pBINPLUS载体上制备得到大豆症青相关病毒(SoSGV)侵染性克隆载体，并且能够通过发根农杆菌K599诱导的毛状根成功侵染大豆，提供一种解决大豆双生病毒(大豆症青相关病毒)侵染性克隆不易侵染大豆问题的方法。本发明专利技术仅用3条引物即可构建2.0个串联重复的侵染性克隆载体；优化大豆中的病毒接种方法：PCR和Western Blot检测结果表明经K599诱导的大豆症青相关病毒能够在多个大豆品种中实现系统侵染，产生症青症状，能作为后续筛选抗性品种体系。体系。体系。

An infectious cloning vector of soybean disease associated virus and an efficient inoculation method for soybean

【技术实现步骤摘要】
一种大豆症青相关病毒侵染性克隆载体与大豆高效接种方法


[0001]本专利技术涉及植物病毒学和基因工程领域，特别涉及一种大豆症青相关病毒(SoSGV)侵染性克隆载体和大豆高效接种方法。

技术介绍

[0002]大豆“症青”是指大豆正常成熟时，植株或部分分枝仍然叶绿、枝青，有荚但豆荚空瘪或者籽粒瘪烂现象。通过Small RNA测序结合生物信息学分析，技术人员在黄淮海大豆主产区多个地方的症青大豆病株中鉴定到一种新型重组双生病毒，暂命名为大豆症青相关病毒(Soybean stay
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green associated virus,SoSGV)(Cheng,R.et al.A new distinct geminivirus causes soybean stay
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green disease.Molecular Plant(2022)doi:10/gptbfj)。
[0003]双生病毒科病毒是世界范围内分布广泛的一类植物DNA病毒，为仅次于马铃薯Y病毒科的第2大植物病毒科，在世界范围内对重要作物造成严重损失。目前本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大豆症青相关病毒侵染性克隆载体，其特征在于，该侵染性克隆载体是将不少于1.2个串联重复的大豆症青相关病毒全基因组序列构建到pBINPLUS载体上制备得到的，所述大豆症青相关病毒的全基因组序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的大豆症青相关病毒侵染性克隆载体，其特征在于，所述的侵染性克隆载体是将2个串联重复的大豆症青相关病毒全基因组序列构建到pBINPLUS载体上制备得到的。3.根据权利要求2所述的大豆症青相关病毒侵染性克隆载体，其特征在于，所述的侵染性克隆载体采用以下步骤制备：(1)使用引物P1和引物P2扩增基因组的第一个全长基因组拷贝，通过无缝连接重组到SalⅠ和BamHⅠ酶切后的pBINPLUS载体，经克隆后提取质粒pBINPLUS
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1.0
×
SoSGV；P1：CAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACGCTGTTAAGCGCCTTGGCGTAAGC；P2：CGAGCTCGGTACCCGGGGATCCGGCAGTAAGTCAGAGGCTCTTAA；(2)使用引物P2和引物P3扩增基因组的第二个全长基因组拷贝，通过无缝连接重组到BamHⅠ酶切后的pBINPLUS
‑
1.0
×
SoSGV质粒；使用引物P4和引物P5筛选阳性克隆；挑选阳性克隆培养，提取质粒pBINPLUS
‑
2.0
×
SoSGV；经引物P4和引物P5测序验证得到大豆症青相关病毒侵染性克隆载体；P3：ATTAAGAGCCTCTGACTTACTGCCGCTGTTAAGCGCCTTGGCGTAAGC；P4：GGATTGCAGAGGAAGATAGT；P5：AATCCAGCTCCGACGTCAAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶小荣，徐毅，程锐祥，梅若鑫，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：