具有改造后的乳糖渗透酶的微生物和含乳糖寡糖的制造方法技术

本发明专利技术的目的在于，提供更高效的利用发酵生产的含乳糖寡糖的制造方法。根据本发明专利技术，通过使用具有生产如特定氨基酸残基被置换为其它氨基酸残基这样改造后的具有乳糖渗透酶活性的蛋白质的能力的微生物，能够与使用具有生产野生型的具有乳糖渗透酶活性的蛋白质的能力的微生物的情况相比更高效地制造2'

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改造后的乳糖渗透酶的微生物和含乳糖寡糖的制造方法


[0001]本专利技术涉及能够高效率地生产含乳糖寡糖的含乳糖寡糖的制造方法。

技术介绍

[0002]据报道，人母乳中含有的乳寡糖(HMO)具有抵御致病菌感染的作用、作为益生元的功能，由于其生理活性而在作为婴幼儿用配方奶粉添加剂方面受到关注(非专利文献1)。
[0003]作为HMO，迄今为止已知有130种以上，其中的大部分为在还原末端具有游离乳糖单元的含乳糖寡糖。
[0004]在利用发酵生产的含乳糖寡糖的制造方法中，已知添加价格较低廉的乳糖作为底物的方法(非专利文献2)。另外，已知从微生物细胞外摄取乳糖是借助乳糖渗透酶进行的(非专利文献3)。
[0005]另一方面，使用具有突变型乳糖渗透酶的微生物的含乳糖寡糖的制造方法、以及乳糖渗透酶的突变对含乳糖寡糖的生产率的影响是未知的。另一方面，从含乳糖寡糖的关注度出发，需要含乳糖寡糖的更高效的制造方法。
[0006]现有技术文献
[0007]非专利文献
[0008]非专利文献1：J Biotechnol(2016)235：61
‑
83
[0009]非专利文献2：Curr Opin Biotechnol(2019)56：130
‑
137
[0010]非专利文献3：J Biotechnol(2015)210：107
‑
115

技术实现思路

[0011]专利技术所要解决的问题
[0012]如上所述，对于含乳糖寡糖，需要更高效的制造方法。本专利技术的目的在于，提供更高效的利用发酵生产的含乳糖寡糖的制造方法。
[0013]用于解决问题的方法
[0014]本专利技术涉及以下方案。
[0015]1.一种微生物，其具有由在下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向其它氨基酸残基的置换的氨基酸序列构成的蛋白质，并且该微生物生产含乳糖寡糖的能力高于亲株，
[0016][1]由序列号2所示的氨基酸序列构成的蛋白质，
[0017][2]由在序列号2所示的氨基酸序列中缺失、置换、插入和/或添加了1～20个氨基酸的氨基酸序列构成且具有乳糖渗透酶活性的突变蛋白，
[0018][3]由与序列号2所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列构成且具有乳糖渗透酶活性的同源蛋白。
[0019]2.根据上述1所述的微生物，其具有由在上述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向L
‑
天冬氨
酸或L
‑
谷氨酸的置换的氨基酸序列构成的蛋白质。
[0020]3.根据上述1或2所述的微生物，其具有由在上述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向L
‑
谷氨酸的置换的氨基酸序列构成的蛋白质。
[0021]4.根据上述1～3中任一项所述的微生物，其通过用重组体DNA转化亲株而得到，所述重组体DNA含有编码由在上述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向其它氨基酸残基的置换的氨基酸序列构成的蛋白质的DNA。
[0022]5.根据上述4所述的微生物，其通过在染色体中整合重组体DNA而得到，所述重组体DNA含有编码由在上述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向其它氨基酸残基的置换的氨基酸序列构成的蛋白质的DNA。
[0023]6.根据上述1～5中任一项所述的微生物，其通过用重组体DNA转化亲株而得到，所述重组体DNA含有具有序列号3所示的碱基序列的DNA。
[0024]7.根据上述6所述的微生物，其通过在染色体中整合重组体DNA而得到，所述重组体DNA含有具有序列号3所示的碱基序列的DNA。
[0025]8.根据上述1～7中任一项所述的微生物，其中，上述亲株为具有生产含乳糖寡糖的能力的微生物。
[0026]9.一种含乳糖寡糖的制造方法，其特征在于，在培养基中培养上述1～8中任一项所述的微生物，使含乳糖寡糖在培养物中生成。
[0027]10.根据上述9所述的制造方法，其中，上述含乳糖寡糖为2
’‑
岩藻糖基乳糖。
[0028]专利技术效果
[0029]根据本专利技术，可以提供能够高效率地生产含乳糖寡糖的含乳糖寡糖的制造方法。
具体实施方式
[0030]1.本专利技术的微生物
[0031]本专利技术的微生物为具有以下的(1)或(2)中记载的蛋白质且生产含乳糖寡糖的能力高于亲株的微生物。
[0032](1)由在下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向其它氨基酸残基的置换的氨基酸序列构成的蛋白质。
[0033][1]由序列号2所示的氨基酸序列构成的蛋白质
[0034][2]由在序列号2所示的氨基酸序列中缺失、置换、插入和/或添加了1～20个氨基酸的氨基酸序列构成且具有乳糖渗透酶活性的突变蛋白。
[0035][3]由与序列号2所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列构成且具有乳糖渗透酶活性的同源蛋白。
[0036](2)由在上述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向L
‑
谷氨酸的置换的氨基酸序列构成的上述(1)中记载的蛋白质。
[0037]上述[1]～[3]中任一项记载的成为基础的蛋白质的氨基酸序列中的与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基是指：在对该成为基础的蛋白质的氨基酸序列与序列号2的氨基酸序列进行比对时，排列在与序列号2的氨基酸序列中的第319位的氨基酸残基相同的位置的氨基酸残基。
[0038]关于上述(1)或(2)中记载的蛋白质的氨基酸序列中与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基被置换为其它氨基酸残基这一点，例如，可以通过对想要确认氨基酸残基的上述(1)或(2)中记载的蛋白质的氨基酸序列与成为基础的上述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列进行比对来进行确认。
[0039]氨基酸序列的比对例如可以使用公知的比对程序ClustalW[Nucelic Acids Research 22，4673，(1994)]来创建。例如，可以由http：//www.ebi.ac.uk/clustalw/(European Bioinformatics Institute)来利用ClustalW。在使用ClustalW创建比对时，参数可以使用例如默认值。
[0040]上述(1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种微生物，其具有由在下述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向其它氨基酸残基的置换的氨基酸序列构成的蛋白质，并且该微生物生产含乳糖寡糖的能力高于亲株，[1]由序列号2所示的氨基酸序列构成的蛋白质，[2]由在序列号2所示的氨基酸序列中缺失、置换、插入和/或添加了1～20个氨基酸的氨基酸序列构成且具有乳糖渗透酶活性的突变蛋白，[3]由与序列号2所示的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列构成且具有乳糖渗透酶活性的同源蛋白。2.根据权利要求1所述的微生物，其具有由在所述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向L
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天冬氨酸或L
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谷氨酸的置换的氨基酸序列构成的蛋白质。3.根据权利要求1或2所述的微生物，其具有由在所述[1]～[3]中任一项记载的蛋白质的氨基酸序列中含有与序列号2所示的氨基酸序列的第319位对应的氨基酸残基向L
‑
谷氨酸的置换的氨基酸序列构成的蛋白质。4.根据权利要求1～3中任一项所述的微生物，其通过用重组体DNA转化亲...

【专利技术属性】
技术研发人员：田畑健一郎，内谷进介，
申请(专利权)人：协和发酵生化株式会社，
类型：发明
国别省市：