一种联合检测肺结核-肺癌疾病的体外诊断试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种联合检测肺结核

【技术实现步骤摘要】
一种联合检测肺结核
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肺癌疾病的体外诊断试剂


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及建立一种肺结核
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肺癌联合检测方法。
技术背景
[0002]全球范围内，肺癌和肺结核是造成死亡的最常见疾病。研究证实，肺结核可以增加肺癌的发病风险，尤其是由肺结核的慢性炎症刺激以及免疫反应，均可导致肺癌的发生。肺癌发生后不恰当的治疗方式也有利于结核分枝杆菌生长，进而导致肺结核的发生。所以在临床工作中，对于肺癌和肺结核的临床诊断就显得非常关键。
[0003]临床上肺癌的诊断方法主要有胸部X线、胸部CT、磁共振、血清肿瘤标志物、支气管镜检查等方法，而肺结核的诊断方法主要有胸部X线、胸部CT、细菌培养法、聚合酶链反应(PCR)、结核抗体测定、支气管镜检查等方法。其中，血清学检测具有创伤性小、操作简便、快速灵敏及稳定性好等优点，具有一定的推广价值和实用价值。
[0004]肺结核和肺癌的临床表现相似，两种疾病共存导致了临床诊断难度很大，目前临床上还没有能够同时检测两种疾病的血清学诊断方法。因此，本专利技术选取 MPT
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64重组蛋白和CFP
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10重组蛋白为肺结核血清检测特异性抗原。其中，MPT
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64 重组蛋白是结核分枝杆菌复合体分泌的蛋白，可引起T细胞反应刺激淋巴细胞分泌γ
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干扰素。CFP
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10是由Rv3874基因编码的小分子分泌蛋白。Rv3874基因可通过影响巨噬细胞鞘脂代谢通路中关键基因的表达，进而影响巨噬细胞的生物学功能，左右肺结核病的诊断及治疗。选取鼠抗人CYFRA21
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1单克隆抗体和鼠抗人 NSE单克隆抗体为肺癌检测线标记，鼠抗兔IgG单克隆抗体为质控线标记。建立联合检测肺结核
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肺癌的诊断方法，具有十分重要的临床应用价值和广阔的市场开发前景。

技术实现思路

[0005]本专利技术建立一种肺结核
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肺癌诊断联合检测方法，通过该诊断方法可同时检测肺结核和肺癌，为解决两病共存致使诊断难度曾大的问题，提供新的诊断思路，且本专利技术的联合检测方法为胶体金疫层析法，应用生物素
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链酶亲和素信号放大系统，极大的提高了检测灵敏度。优选的硝酸纤维素膜(NC膜)、玻璃纤维膜、封闭液，优化的抗原、抗体包被浓度提高了试纸条的检测质量。采用一卡双通道的检测模式，具有创伤面小，价格低廉，操作简单，方便快捷等优点，具有一定的推广价值和实用价值。
[0006]为了达到以上目的，采取以下手段：
[0007]1.一卡双通道：同时检测肺结核和肺癌两种疾病，可大大提高肺癌肺结核的诊断效率。使用时，可将检测样本直接滴入样品垫的卡槽内，5
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10min即可获得检测结果，检测方便快捷，难度低，普通患者即可操作。
[0008]2.试验中使用了生物素
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链酶亲和素信号放大系统，提高了检测的灵敏度。
[0009]3.通过对四种影响硝酸纤维素膜的主要因素进行分析，最后确定选用美国PALL公司的Immunodyne ABC膜作为试验用的硝酸纤维素膜。
[0010]4.经测试发现SB08玻璃纤维膜释放胶体金的速度最快，残余量最少。因此，本专利技术的玻璃纤维膜选用SB08进行制作。
[0011]5.检测线和质控线最佳包被浓度分别为MPT
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64重组蛋白和CFP
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10重组蛋白在硝酸纤维素膜上包被的最佳抗原包被浓度为2.5mg/mL，鼠抗人CYFRA21
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1单克隆抗体和鼠抗人NSE单克隆抗体在硝酸纤维素膜上包被的最佳抗体包被浓度为4.0ng/mL，鼠抗兔IgG单克隆抗体在硝酸纤维素膜上包被的最佳抗体包被浓度为1.5mg/mL。
[0012]6.封闭液选择10％BSA进行配制，稳定性最好且无拖带现象。
附图说明
[0013]1.图1为胶体金试纸条结构示意图
[0014]2.图2为胶体金试纸条的组装图，其中，左侧为结核试纸条组装图，右侧为肺癌试纸条组装图
[0015]3.图3为一卡双通道试剂组装图
[0016]具体实施案例
[0017]选取2021年10月至2021年12月期间在吉林大学中日联谊医院就诊的患者，按照入选标准严格筛选入选组患者。共收集肺结核患者样本50例，肺癌患者样本50例，同期的健康体检者50例作为对照组。
[0018](1)入选标准：具有咳嗽、咳痰、痰中带血、胸痛及呼吸困难等典型症状的患者，经临床病理诊断、胸部X线、胸部CT等检查确诊的病例。
[0019](2)排除标准：患严重疾病者、近半年内重大外伤、手术史及吸烟的患者。
[0020]所有研究对象空腹8
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10小时后采集静脉血，采血容器为黄管，采血量为2
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3ml。待标本静置30min充分凝固后，用3500rpm离心机离心10min，将离心后无溶血的血清分装在EP管中，放置在冷冻冰箱保存备用。
[0021]将收集的50例肺癌患者血清标本、50例肺结核患者血清标本与同期的50 例体检血清标本作为对照，将肺结核试纸条与酶标仪检测结果进行比较，肺癌试纸条与罗氏全自动电化学发光仪e602仪器检测结果进行比较，获得如下结果：
[0022]肺癌组样本检测结果见表1。
[0023]表1肺癌组样本检测结果
[0024][0025]χ2＝0.071，P＝0.791
[0026]由此得出肺癌试纸条的阳性符合率为84.0％，阴性符合率为88.0％，总符合率为86.0％。χ2＝0.071，P＝0.791>0.05，说明两种检测方法差异无统计学显著性。
[0027](2)肺结核组样本检测结果见表2。
[0028]表2肺结核组样本检测结果
[0029][0030]χ2＝0.364，P＝0.549
[0031]由此得出肺结核试纸条的阳性符合率为86.0％，阴性符合率为92.0％，总符合率为89.0％。χ2＝0.364，P＝0.549>0.05，说明两种检测方法差异无统计学显著性。
[0032]临床血清学标本比对得出，肺癌比对的符合率为86.0％，肺结核比对的符合率为89.0％，取得了较为满意的结果。肺结核
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肺癌体外诊断试剂满足检测要求，具有广阔的市场开发前景。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肺结核
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肺癌疾病体外诊断试剂的建立肺结核
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肺癌诊断试纸条由样品吸收垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫四部分组成；胶体金溶液喷在玻璃纤维膜上作为胶体金垫；检测线和质控线包被物在硝酸纤维素膜上；然后将以上四部分依次相互叠加粘贴于PVC底板上，如图1、图2，将肺癌试纸条安装在一卡双通道卡槽的左侧通道，肺结核试纸条安装在卡槽的右侧通道，如图3；详细制作流程如下：玻璃纤维膜SB08在TBA溶液中浸泡30min后，在37℃条件下待其干燥；将干燥好的玻璃纤维膜剪成6mm宽的小块，均匀的涂上胶体金溶液，在4℃条件下干燥1h，即完成胶体金结合垫的制作；标记好的胶体金结合垫在4℃条件下保存备用；在Immunodyne ABC膜的检测线与质控线处点膜后，在37℃条件下干燥1h，然后进行PBS洗涤3次，室温条件下干燥30分钟；再加入封闭液，在37℃干燥1h后，进行PBS洗涤3次，室温干燥30分钟处理，即完成膜的制作；将吸水...

【专利技术属性】
技术研发人员：张林波，曲佳音，李楠，张贫博，代云鹏，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：