羊类精液稀释液及其制备方法技术

本发明专利技术属于羊类繁殖技术领域，涉及羊类精液稀释液，包括以下质量份数的组分：柠檬酸1～2份、果糖1.5～2.5份、Tris2～4份、卵黄5～18份、青霉素钠0.1～0.4份、硫酸链霉素0.1～0.4份和超纯水100份。本发明专利技术有效的延长了羊类精液的保存时间，保持精子运动性能的缓慢稳定下降，减缓了对精子结构如质膜和顶体的损伤。即本发明专利技术提供了适合羊类精液保存的稀释液，显著地提高了精液保存质量。地提高了精液保存质量。

【技术实现步骤摘要】
羊类精液稀释液及其制备方法


[0001]本专利技术涉及羊类精液稀释液及其制备方法，属于羊类繁殖


技术介绍

[0002]目前，羊类精液保存主要以低温保存为主，在生产实践中有效受精时间为3d。羊类精液离开机体进行体外保存时，精子新陈代谢并未停止。因此，稀释液中应含有满足精子新陈代谢的糖类、维持正常渗透压的缓冲物质以及免受低温引起冷休克的抗冻物质。尽管市场上有商品化的羊类精液稀释液，但这并不能满足生产实践的需要。目前大部分养殖场大都是采用自然交配的方式，规模化养殖场可能会采用精液常温保存的方式，因为现有稀释液配方的低温保存效果不稳定，可能保存时间只有1
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2天，难以在生产中推广应用。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种羊类精液稀释液，可以减缓精子质膜和顶体的损伤，使其下降速率低于其它几种稀释液，有效的维护了精子结构的稳定，保持了其生理功能的完整。
[0004]本专利技术提供的技术方案如下：
[0005]一种羊类精液稀释液，采用以下质量份数的原料制备而成：柠檬酸1～2份、果糖1.5～2.5份、Tris2～4份、卵黄5～18份、青霉素钠0.1～0.4份、硫酸链霉素0.1～0.4份和超纯水100份。
[0006]进一步的，采用以下质量份数的原料制备而成：柠檬酸1.64份、果糖2份、Tris3.07份、卵黄10份、青霉素钠0.2份、硫酸链霉素0.2份和超纯水100份。
[0007]进一步的，所述卵黄的质量为稀释液总质量的5～15％。
[0008]进一步的，所述青霉素钠和硫酸链霉素为8～12万IU。
[0009]本专利技术还提供上述的羊类精液稀释液制备方法，将柠檬酸、果糖、Tris、青霉素钠、硫酸链霉素和超纯水充分溶解后过滤除菌，再加入卵黄充分振荡后置于冰箱过夜，第二天离心取上清。
[0010]进一步的，冰箱温度为4℃。
[0011]进一步的，离心温度为4℃。
[0012]进一步的，离心转速为12000g，离心时间为15min。
[0013]本专利技术还提供上述的羊类精液稀释液使用方法，将羊类精液稀释液进行外观形态学检查，选取射精量正常、颜色正常和无异常气味的精液，再采用CASA进行精液品质检查，将检查合格的精液混合；采用权利要求1～3任一项所述的羊类精液稀释液对精液进行等温稀释，之后用无菌棉包裹8层，在室温下放置1h以缓慢降温，最后放入4℃冰箱进行低温保存。
[0014]进一步的，精液与稀释液的体积比为1:9。
[0015]本专利技术的目的是这样实现的，羊类精液稀释液，所述的稀释液配方共有四种，稀释
液一由1～3g的柠檬酸钠、2～4g葡萄糖、0.1～0.4g的青霉素钠和0.1～0.4g硫酸链霉素溶于100ml超纯水构成，之后再加入卵黄。
[0016]稀释液二由1～1.8g柠檬酸钠、2～4g葡萄糖、0.1～0.4g的青霉素钠和0.1～0.4g硫酸链霉素溶于100ml超纯水构成。
[0017]稀释液三由2～3g果糖，9～11g脱脂奶粉，0.2～0.5g大豆卵磷脂、0.1～0.4g的青霉素钠和0.1～0.4g硫酸链霉素溶于100ml超纯水构成。
[0018]稀释液四由1～2g柠檬酸、1.5～2.5g果糖、2～4gTris、0.1～0.4g的青霉素钠和0.1～0.4g硫酸链霉素溶于100ml超纯水构成，之后再加入卵黄。
[0019]其中稀释液二和稀释液三充分溶解后，过滤除菌备用即可。稀释液一和稀释液四在彻底溶解后，过滤除菌，再取80～100ml的稀释液，加入5％～15％的卵黄(占最后稀释液总体积的百分含量)，充分震荡溶解后置于4℃冰箱过夜，第二天低温离心后，取上清液备用。至此完成稀释液的制备。
[0020]所述的稀释液一中的柠檬酸钠、葡萄糖、卵黄、青霉素钠、链霉素硫酸盐的含量为：2g、3g、10％、0.2g(10万IU)、0.2g(10万IU)。
[0021]所述的稀释液二中的柠檬酸钠、葡萄糖、青霉素钠、链霉素硫酸盐的含量为：1.4g、3g、0.2g(10万IU)、0.2g(10万IU)。
[0022]所述的稀释液三中的果糖、脱脂奶粉、大豆卵磷脂、青霉素钠、链霉素硫酸盐的含量为：2.5g、10g、0.375g、0.2g(10万IU)、0.2g(10万IU)。
[0023]所述的稀释液四中的柠檬酸、果糖、Tris、卵黄、青霉素钠、链霉素硫酸盐的含量为：1.64g、2g、3.07g、10％卵黄、0.2g(10万IU)、0.2g(10万IU)。
[0024]羊类精液稀释液的使用方法为，采集后的精液首先进行外观形态学检查，选取射精量正常、颜色正常和无异常气味的精液带回实验室，采用CASA进行精液品质检查，将检查合格的精液混合。采用等温的四种稀释液对精液进行稀释，之后用无菌棉包裹8层，在室温下放置1h以缓慢降温，最后放入4℃冰箱进行低温保存。
[0025]有益效果
[0026]本试验从影响精液保过程中精子所需的营养物质、缓冲物质和抗冻物质等因素为出发点，通过检测羊类精子在不同保存时间点精子活率、活力等动力学参数、质膜完整性和顶体完整性等指标筛选出适合羊类精液低温保存的最佳稀释液配方，以期在生产实践中作为羊类精液低温保存的基础稀释液，为有效延长羊类精液低温保存时间和提高受胎率提供理论参考。
[0027]本专利技术方法科学合理，通过本专利技术提供的羊类精液稀释液，本专利技术使用四种低温保存稀释液配方，对精液进行低温保存，利用CASA对精液保存期间的精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率进行检测，利用HOST试验对精液保存期间的质膜完整性进行检测，利用考马斯亮蓝染色对精液保存期间的顶体完整性进行检测。探究筛选稀释液对羊类精液低温保存的影响，得到保存效果较优的稀释液。
[0028]本专利技术得到的稀释液四可以有效的延长精液的保存时间，提高精子活率和活力，使精子长时间保持相对稳定的运动速率，另外该稀释液四还可以减缓精子质膜和顶体受到损伤，使其下降速率低于其它几种稀释液，有效的维护了精子结构的稳定，保持了其生理功能的完整。为人工授精技术的顺利实施奠定了基础。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。
[0030]材料与方法；
[0031]1.试验试剂与耗材；
[0032]D
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果糖、葡萄糖、柠檬酸钠、脱脂奶粉、大豆卵磷脂、柠檬酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)、青霉素钠、链霉素硫酸盐、新鲜鸡蛋、考马斯亮蓝G
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250、4％多聚甲醛、85％磷酸、95％酒精；迈郎精子全自动分析系统(CASA)购自南宁松景天伦生物科技有限公司。
[0033]2.具体操作过程；
[0034]为了使本专利技术的目的、技术方案及有益效果更加明了，以下结合具体例子，对本专利技术进一步详细说明。本处描述的具体例子仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羊类精液稀释液，其特征在于，采用以下质量份数的原料制备而成：柠檬酸1～2份、果糖1.5～2.5份、Tris2～4份、卵黄5～18份、青霉素钠0.1～0.4份、硫酸链霉素0.1～0.4份和超纯水100份。2.根据权利要求1所述的羊类精液稀释液，其特征在于，采用以下质量份数的原料制备而成：柠檬酸1.64份、果糖2份、Tris3.07份、卵黄10份、青霉素钠0.2份、硫酸链霉素0.2份和超纯水100份。3.根据权利要求1所述的羊类精液稀释液，其特征在于，所述卵黄的质量为稀释液总质量的5～15％。4.根据权利要求1所述的羊类精液稀释液，其特征在于，所述青霉素钠和硫酸链霉素为8～12万IU。5.根据权利要求1～4任一项所述的羊类精液稀释液制备方法，其特征在于，将柠檬酸、果糖、Tris、青霉素钠、硫酸链霉素和超纯水充分溶解后过滤除菌，再加入卵黄充...

【专利技术属性】
技术研发人员：李拥军，张柳明，王彦虎，王强，康言，孙晓梅，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：