痘苗病毒和使用痘苗病毒的方法技术

本公开涉及治疗癌症的方法和物质。例如，本发明专利技术提供了重组痘苗病毒，其具有在被感染细胞表面上指导膜结合的IL

Vaccinia virus and methods of using vaccinia virus

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】痘苗病毒和使用痘苗病毒的方法
[0001]优先权要求
[0002]本申请要求2019年11月20日提交的美国临时专利申请第62/938,094号的优先权，其完整内容通过引用纳入本文。
[0003]背景
1.

[0004]本申请涉及治疗癌症的方法和物质。例如，本申请提供了重组痘苗病毒和使用重组痘苗病毒治疗癌症等疾病的方法。在某些情况下，本文提供的重组痘苗病毒可以用作溶瘤剂(例如，用于治疗癌症)。
2.
技术介绍

[0005]尽管作出了巨大努力，癌症仍然是美国的一个主要公共健康问题，仅2017年就新增160多万例(美国国家癌症研究所，“Cancer Stat Facts:Cancer of Any Site，seer.cancer.gov/statfacts/html/all.html)。传统疗法，如化疗、放疗和外科手术往往会失败，尤其是在癌症晚期。癌症免疫疗法也可用于治疗癌症。然而，虽然癌症免疫治疗后可观察到治疗反应，但这些成功仅限于少部分患者(Hodi等人，N.Engl.J.Med.，363:711
‑
723(2010)；和Zou等，Sci.Transl.Med.,8:328rv324(2016))。
[0006]专利技术简述
[0007]本申请提供了治疗癌症的方法和物质。在某些情况下，本申请提供了具有溶瘤抗癌活性的重组痘苗病毒。例如，具有溶瘤抗癌活性的重组痘苗病毒可包括编码白细胞介素12(IL
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12)p35多肽的核酸和编码IL
‑r/>12p40多肽的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括膜锚定多肽序列。在一些情况下，本文所述的一种或多种重组痘苗病毒(例如，一种或多种具有溶瘤抗癌活性的重组痘苗病毒)可用作溶瘤剂(例如用于治疗癌症)。例如，本文所述的一种或多种重组痘苗病毒可被给予患有癌症的哺乳动物以治疗该哺乳动物。
[0008]溶瘤病毒疗法可通过利用重组痘苗病毒活化先天免疫(例如，诱导免疫原性细胞死亡)和/或激活适应性免疫(例如，提供针对肿瘤的终身免疫)，提供癌症治疗的替代方法。如本文所示，重组痘苗病毒可设计为包括编码可表达IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽的多顺反子转录本的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括膜锚定多肽序列，且这种重组痘苗病毒可用于感染癌细胞，使癌细胞表达IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽，并使表达的IL
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12p35多肽和表达的IL
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12p40多肽形成膜结合的IL
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12多肽(例如，包括IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽的IL
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12p70异二聚体)。在某些情况下，重组痘苗病毒包括编码IL
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12p35多肽的核酸和编码IL
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12p40多肽的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括膜锚定多肽序列，可用于将非T细胞炎性肿瘤转化为T细胞炎性肿瘤。例如，膜结合的IL
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12多肽可以促进更多活化的CD4
+
和CD8
+
T细胞以及更少调节性T细胞(Treg)、粒细胞髓源性抑制细胞(G
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MDSC)和耗尽的CD8
+
T细胞的肿瘤浸润，
增加干扰素
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γ(IFN
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γ)的表达，降低转化生长因子β(TGF
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β)、环氧合酶
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2(COX
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2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达，导致转化的免疫原性肿瘤并提高生存率。同样如本文所示，重组痘苗病毒包括编码可表达IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽的多顺反子转录本的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括膜锚定多肽序列，其可给予哺乳动物而不诱导系统性IL
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12毒性。例如痘苗病毒设计为包含编码IL
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12p35多肽的核酸和编码IL
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12p40多肽的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包含膜锚定多肽序列，该痘苗病毒可将该核酸递送至肿瘤细胞，以使肿瘤细胞表达一种或多种膜结合的IL
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12多肽，使表达的膜结合的IL
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12多肽保持附着在肿瘤细胞上，而不引起肺水肿。当重组痘苗病毒包括编码IL
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12p35多肽的核酸和编码IL
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12p40多肽的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括膜锚定多肽序列，其与PD
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1阻断剂一起给予时在多种肿瘤模型中可以观察到有效的抗肿瘤反应。本文提供的结果证明，设计为包含编码IL
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12p35多肽的核酸和编码IL
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12p40多肽的核酸(其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括膜锚定多肽序列)的痘苗病毒可以用作癌症的溶瘤病毒疗法。
[0009]能够通过给予一种或多种重组痘苗病毒将“冷”肿瘤(例如，非T细胞炎性肿瘤)转化为“热”肿瘤(例如，T细胞炎性肿瘤)，这些重组痘苗病毒设计为包括编码IL
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12p35多肽的核酸和编码IL
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12p40多肽的核酸，其中IL
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12p35多肽和IL
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12p40多肽中的至少一个(或仅一个)包括如本文所述的膜锚定多肽序列，所述病毒可允许临床医生和患者用痘苗病毒作为安全有效的溶瘤病毒疗法。
[0010]总的说，本申请的一个方面特征是重组痘苗病毒，其包含痘苗病毒基因组，所述基因组包含(a)编码第一多肽的核酸和(b)编码第二多肽的核酸，其中第一多肽包含IL
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12p35多肽序列，其中第二多肽包含IL
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12p40多肽，其中，所述第一多肽或所述第二多肽包含膜锚定多肽序列。IL
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12p35多肽序列可以是全长人IL
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12p35多肽序列。IL
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12p35多肽序列可以是全长小鼠IL
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12p35多肽序列。IL
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12p40多肽序列可以是全长人IL...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组痘苗病毒，其包含痘苗病毒基因组，包含(a)编码第一多肽的核酸和(b)编码第二多肽的核酸，其中所述第一多肽包含IL
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12p35多肽序列，其中所述第二多肽包含IL
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12p40多肽，和其中所述第一多肽或所述第二多肽包含膜锚定多肽序列。2.如权利要求1所述的重组痘苗病毒，其中所述IL
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12p35多肽序列是全长人IL
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12p35多肽序列。3.如权利要求1所述的重组痘苗病毒，其中所述IL
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12p35多肽序列是全长小鼠IL
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12p35多肽序列。4.如权利要求1
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3中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述IL
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12p40多肽序列是全长人IL
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12p40多肽序列。5.如权利要求1
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3中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述IL
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12p40多肽序列是全长小鼠IL
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12p40多肽序列。6.如权利要求1
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5中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述膜锚定多肽序列包含具有糖基磷脂酰肌醇(GPI)修饰的多肽。7.如权利要求6所述的重组痘苗病毒，其中所述膜锚定多肽序列长度为约10个氨基酸至约50个氨基酸。8.如权利要求6
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7中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述具有GPI修饰的多肽源自CD16b多肽。9.如权利要求8所述的重组痘苗病毒，其中所述CD16b多肽是人CD16b多肽。10.如权利要求1
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9中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述第一多肽包含所述膜锚定多肽序列。11.如权利要求10所述的重组痘苗病毒，其中所述第一多肽包含所述IL
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12p35多肽序列和所述膜锚定多肽序列之间的多肽接头。12.如权利要求1
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9中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述第二多肽包含所述膜锚定多肽序列。13.如权利要求12所述的重组痘苗病毒，其中所述第二多肽包含所述IL
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12p40多肽序列和所述膜锚定多肽序列之间的多肽接头。14.如权利要求11和13中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述多肽接头的长度为约1个氨基酸至约25个氨基酸。15.如权利要求14所述的重组痘苗病毒，其中所述多肽接头包含(G4S)3序列。16.如权利要求14所述的重组痘苗病毒，其中所述多肽接头包含A(EA3K)4AAA(SEQ ID NO:14)序列。17.如权利要求1
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16中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述编码所述第一多肽的核酸可操作地连接到能够驱动表达所述第一多肽和所述第二多肽的多顺反子转录本转录的启动子。18.如权利要求17所述的痘苗病毒，其中所述启动子选自p7.5e/l启动子和pSe/l启动子。19.如权利要求17
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18中任一项所述的重组痘苗病毒，其中所述编码所述第一多肽的核酸和所述编码所述第二多肽的核酸由内部核糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：匹兹堡大学联邦系统高等教育，
类型：发明
国别省市：