SLC16A10的激动剂或者抑制剂在制备治疗色素性皮肤病药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，本发明专利技术提供了SLC16A10的激动剂或者抑制剂在制备治疗色素性皮肤病药物中的应用，所述色素性皮肤病包括色素减少性皮肤病以及色素增加性皮肤病。本发明专利技术的研究表明SLC16A10在黄褐斑、高黑素含量的色素痣组织中高表达，过表达SLC16A10可能通过提高酪氨酸酶活性的途径促进了黑素生成。SLC16A10是色素性皮肤病的潜在治疗靶点。SLC16A10是色素性皮肤病的潜在治疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
SLC16A10的激动剂或者抑制剂在制备治疗色素性皮肤病药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及SLC16A10的激动剂或者抑制剂在制备治疗色素性皮肤病药物中的应用。

技术介绍

[0002]黄褐斑、雀斑等色素性皮肤病在临床中十分常见，易出现于暴露在阳光下的皮肤区域，并经常累及面部，给患者日常生活带来了很大的经济和心理负担。流行病学研究显示黄褐斑等疾病可出现于各色人种中，尤其好发于亚洲、非洲和中东等肤色较深的中青年女性人群中。该类病受到遗传因素、紫外线辐射、激素、炎症以及药物等多种因素的影响。目前该病的发病机制尚未完全阐明，但形成的共识是这类疾病中均存在黑素细胞的功能活跃。目前这类疾病常用的治疗方法包括含有美白成分的局部药物治疗、化学换肤以及微针、激光等物理治疗，但是存在疗效差、费用高、易复发等缺点。因此，探究黑素合成的新机制，为黄褐斑、雀斑等色素性皮肤病的治疗提供新的靶点及思路具有重要意义。除此之外，色素减少性皮肤病包括白癜风、无色素痣、单纯糠疹、炎症后色素减退等疾病，也是困扰很多患者的常见疾病。
[0003]皮肤的色素沉着最主要是由黑素细胞功能的活跃程度决定的。黑素细胞黑素合成功能越活跃，皮肤色素沉着越多；反之，黑素细胞黑素合成功能受损或受抑制，皮肤色素沉着将会减少。黑素合成是一个多步骤的酶促生化反应，其中酪氨酸酶（TYR）是调控黑素合成的关键限速酶，因此TYR可以作为黑素合成的关键分子标记物，也可以作为评估黑素细胞功能活跃程度的指标。
[0004]溶质运载蛋白16A家族成员10 (SLC16A10)是SLC16家族重要成员之一，被报道参与甲状腺功能维持、成骨细胞分化、肾小管重吸收等多种生物学功能的调控，但目前尚无文献报道SLC16A10是否参与黑素合成功能的调控。本研究首次探索了SLC16A10对黑素合成的影响及可能机制。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是探究了SLC16A10对黑素合成的影响及可能机制，提供一种新的治疗色素性皮肤病靶点和药物。
[0006]为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案是：SLC16A10的激动剂或者抑制剂在制备治疗色素性皮肤病药物中的应用。
[0007]优选的，所述色素性皮肤病包括色素减少性皮肤病以及色素增加性皮肤病。
[0008]进一步优选的，所述色素减少性皮肤病包括白癜风、无色素痣、单纯糠疹、炎症后色素减退。
[0009]优选的，所述色素增加性皮肤病包括黄褐斑、雀斑、咖啡斑、炎症后色素沉着。
[0010]进一步优选的，SLC16A10的激动剂是SLC16A10的过表达质粒。所述SLC16A10的过
LightCycler480II）上进行。mRNA表达量的计算以GAPDH为内参。
[0020]4、Western blot（WB)使用含蛋白酶抑制剂混合物（Thermo Fisher）和磷酸酶抑制剂混合物（Thermo Fisher）的RIPA裂解缓冲液提取细胞的总蛋白。10％SDS
‑
PAGE电泳分离总蛋白，并将蛋白转移到PVDF膜上。 用5％脱脂奶粉封闭后，将膜与一抗（SLC16A10）（购于北京BIOSS公司）在4
°
C孵育过夜，然后在室温下与二抗孵育1小时。通过增强的LI
‑
COR Odyssey红外成像系统（LI
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COR Biosciences，NE，美国）检测蛋白含量。GAPDH为内参。
[0021]5、免疫组化色素痣切片通过脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶失活、血清封闭后，与一抗SLC16A10在4
°
下孵育过夜，随后与二抗、HRP各孵育20分钟，并用DAB染色。通过倒置荧光显微镜（蔡司，中国）观察染色结果。免疫试剂盒购买于BIOSS（中国，北京）。
[0022]6、Masson
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Fontana黑素染色经过处理的细胞用PBS洗两次，加4%多聚甲醛固定15分钟至20分钟，弃去多聚甲醛后用双蒸水洗5
‑
6次，每次5分钟，六孔板每个孔加1mL的氨银溶液，避光在56℃水浴锅中孵育，每隔5分钟观察一次，当反应至肉眼可见的微黄时弃去氨银溶液终止反应，加1mL的海波溶液反应1至5分钟，用双蒸水洗2
‑
3遍，加1mL 的PBS在六孔板中即可去显微镜下观察拍照。组织切片的Masson
‑
Fontana黑素染色步骤大致同细胞。
[0023]7、多巴染色观察黑素经过处理的细胞用PBS洗两遍，加4%多聚甲醛固定30分钟，吸弃固定液，用PBS洗3
‑
5遍，每次5分钟。然后加入0.3%的TritonX
‑
100通透细胞30分钟，之后PBS洗3次，每次5分钟。最后加L
‑
Dopa (0.1%)后在培养箱中孵育过夜，中间可换液一次。然后在倒置显微镜拍照记录。
[0024]8、NaOH法黑素含量测定经过处理的细胞弃去上清，用PBS洗两遍，加胰酶消化1分钟（37℃培养箱中），加完全培养基中和胰酶，用枪头将细胞吹打下来并移入1.5的eppendorf管中，取一部分细胞计数，剩余细胞悬液离心5分钟，1500 rmp,弃上清后加PBS轻轻吹打混匀后离心，条件同前，重复两次，弃去上清后加入用DMSO配好的1M NaOH 500μL，在涡旋仪震荡使之充分裂解，在37℃水浴锅中反应一小时，移入96孔板后用酶标仪检测在450nm下的光密度值（OD值）。
[0025]9、酪氨酸酶活性检测经过处理的细胞取出六孔板，弃去上清，加入PBS洗两遍，加入胰酶消化细胞1分钟后加完全培养基中和，离心（800 rmp, 5分钟），加1mL PBS重悬细胞，取出一部分计数，剩余离心（800 rmp,5分钟）,弃去上清后加入500 μL的0.5%脱氧胆酸钠溶液（蒸馏水配置），震荡摇匀，在0℃放置15分钟，在水浴锅放置10分钟，加入0.1% L
‑
DOPA (PBS配置) 500 μL后充分震荡混匀，水浴锅反应1h后移入96孔板，在酶标仪检测OD值。
[0026]10、酪氨酸酶（TYR）探针检测酪氨酸酶活性经过处理的细胞用PBS清洗两次，用DMEM稀释TYR活性探针（a resorufin
‑
based fuorescent probe），稀释比例为1:1000，六孔板每个孔加入2ml，孵育两个小时，用PBS洗4
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5次后加入新鲜的培基，在显微镜下拍照保存。
[0027]11、统计分析
使用GraphPadPrism9.0.0软件进行统计学分析，组间比较均采用t检验。P<0.05被认为具有统计学意义，*表示P<0.05，**表示P<0.01。
[0028]二、结果1.SLC16A10在黄褐斑皮损中高表达在黄褐斑数据集GSE72140中，我们分析发现相对于正常皮肤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SLC16A10的激动剂或者抑制剂在制备治疗色素性皮肤病药物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征是，所述色素性皮肤病包括色素减少性皮肤病以及色素增加性皮肤病。3.根据权利要求2所述应用，其特征是，所述色素减少性皮肤病包括白癜风、无色素痣、单纯糠疹、炎症后色素减退。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾庆海，罗丽萍，陈静，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：