一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白及其应用，属于生物技术检测领域。该蛋白的序列如SEQ ID No:3所示，基因的序列如SEQ ID No:2所示。本发明专利技术还提供包含所述基因的重组载体或细胞，一种口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒。所述试剂盒包括采用所述蛋白包被的酶标板和检测抗体，所述检测抗体是保藏编号为CGMCC No.45034的杂交瘤细胞株FMDV

A protein for detecting foot and mouth disease virus antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于生物技术检测领域，具体涉及一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]口蹄疫病毒(Foot
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and
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mouth disease virus，FMDV)引起的口蹄疫(Foot
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and
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mouth disease，FMD)是一种急性、热性、高度接触性传染病，传染对象主要为猪、牛、羊等偶蹄动物，易感动物多达70余种。FMD的临床症状主要表现为体温升高，口腔黏膜、舌面、鼻镜、蹄部、乳房、皮肤发生水泡和溃疡，发病率高，可极大削弱患病动物的生产能力，是危害全球畜牧养殖业发展的重大动物疫病之一。因为FMD的存在，相关易感动物的肉制品出口贸易数量会大幅下降，各国经济往来也会因此受到阻碍，这就使得FMD的防疫工作显得更为重要。
[0003]大多数国家防控口蹄疫的核心策略是强制接种灭活疫苗进行免疫预防，因此在临床检测中，如何正确区分“免疫与感染”是诊断的关键，这对于口蹄疫的防控十分重要，也是OIE判定有无FMD流行的依据。FMDV的NSP(非结构蛋白)是在病毒的增殖过程中合成并释放的，机体免疫灭活疫苗后，理论上不产生针对NSP的抗体，因此NSP可用来做鉴别诊断。
[0004]现有检测口蹄疫病毒抗体的试剂盒，灵敏度和特异性还不能满足实际需要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白及其应用，灵敏度和特异性较高，可以鉴别是FMDV疫苗免疫还是自然感染。
[0006]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
[0007]一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白，序列如SEQ ID No:3所示。
[0008]编码权利要求1所述蛋白的基因。
[0009]在本专利技术中，所述基因的序列如SEQ ID No:2所示。
[0010]本专利技术还提供包含所述基因的重组载体或细胞。
[0011]一种重组大肠杆菌菌株，所述重组大肠杆菌菌株含有携带权利要求2所述基因的表达载体，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2020402，保藏日期为2020年8月7日。
[0012]本专利技术还提供所述蛋白在制备用于检测口蹄疫病毒的试剂或者用于预防和/或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的用途。
[0013]一种口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包括采用权利要求1所述蛋白包被的酶标板和检测抗体，所述检测抗体是保藏编号为CGMCC No.45034的杂交瘤细胞株FMDV
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3B
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1分泌的。
[0014]在本专利技术中，所述检测试剂盒中还包括二抗，所述二抗为HRP标记的羊抗鼠IgG抗体。
[0015]在本专利技术中，还包括终止液和洗涤液，所述终止液为2M的硫酸水溶液，所述洗涤液
为含有吐温20的PBS缓冲液。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术建立的口蹄疫抗体竞争ELISA试剂盒，是针对口蹄疫病毒非结构蛋白3B蛋白的抗体，3B蛋白参与RNA病毒的起始合成和衣壳的形成，且3B蛋白在不同血清型的口蹄疫毒株之间高度保守，因此可以用于检测FMDV，尤其是可以鉴别是FMDV疫苗免疫还是自然感染产生的抗体。通过设计了大量的抗原，发现仅有SEQ ID NO：2所示的序列编码的抗原，不仅可以实现可溶性表达，而且可以作为包被抗原，配合本专利技术筛选的杂交瘤细胞株FMDV
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3B
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1分泌的单克隆抗体，对口蹄疫抗体实现高灵敏度、高特异性的检测。
附图说明
[0017]图1是重组表达载体pET
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32a
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FMDV
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3B
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opti的结构示意图。
[0018]图2是重组表达载体pET
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32a
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FMDV
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3B
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opti经EcoR I和Not I双酶切鉴定电泳图；泳道1：pET
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32a
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FMDV
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3B
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opti双酶切产物，泳道2：载体pET
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32a双酶切产物。
[0019]图3为经IPTG诱导后各重组菌裂解产物上清和沉淀的SDS
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PAGE电泳图，M：蛋白Marker；泳道1：重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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FMDV
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3B裂解产物上清；泳道2：重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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FMDV
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3B裂解产物沉淀；泳道3：重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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FMDV
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3B
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opti裂解产物上清；泳道4：重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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FMDV
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3B
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opti的裂解产物沉淀。
[0020]图4是IPTG浓度对FMDV
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3B
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opti蛋白表达影响的SDS
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PAGE鉴定图；M：蛋白Marker；泳道1：0.3mM IPTG诱导浓度；泳道2：0.4mM IPTG诱导浓度；泳道3：0.5mM IPTG诱导浓度；泳道4：0.6mM IPTG诱导浓度；泳道5：0.7mM IPTG诱导浓度；泳道6：0.8mM IPTG诱导浓度；泳道7：0.9mM IPTG诱导浓度；泳道8：1mM IPTG诱导浓度。
[0021]图5是纯化的重组FMDV
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3B
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opti电泳图，其中泳道1是重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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FMDV
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3B
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opti裂解液上清；泳道2是纯化过程中的蛋白滤液；泳道3是纯化后的重组FMDV
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3B
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opti。
[0022]图6杂交瘤细胞株FMDV
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3B
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1制备的单克隆抗体的Western Blot鉴定图，M是蛋白Marker。
[0023]图7显示了本专利技术试剂盒与商品化试剂盒的检测结果对比。
具体实施方式
[0024]鉴于现有技术的缺陷，本案专利技术人经长期研究和大量实践，得以提出本专利技术的技术方案，下面将对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测口蹄疫病毒抗体的蛋白，其特征在于：序列如SEQ ID No:3所示。2.编码权利要求1所述蛋白的基因。3.根据权利要求2所述基因，其特征在于所述基因的序列如SEQ ID No:2所示。4.包含权利要求3所述基因的重组载体或细胞。5.一种重组大肠杆菌菌株，其特征在于所述重组大肠杆菌菌株含有携带权利要求2所述基因的表达载体，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2020402，保藏日期为2020年8月7日。6.权利要求1所述蛋白在制备用于检测口蹄疫病毒的试剂或者用于预防和/或治疗口蹄疫病毒感染的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛峰，钱炳旭，姜焱，戴建君，任建鸾，汤芳，曾德新，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：