一种基于GOx@GA@MIL-101快速简便识别葡萄糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于GOx@GA@MIL

【技术实现步骤摘要】
一种基于GOx@GA@MIL
‑
101快速简便识别葡萄糖的方法


[0001]本专利技术涉及葡萄糖识别
，具体涉及一种基于GOx@GA@MIL
‑
101快速简便识别葡萄糖的方法。

技术介绍

[0002]目前，传统的葡萄糖检测的方法主要包括DNS比色，菲林滴定和高效液相色谱等，均需要花费大量的时间才能完成检测，同时一个样品往往需要多次重复操作，能够进行的实验组数十分有限，并且具有灵敏度差，专一性不强的特点，容易造成实验数据误差导致实验重复性差。

技术实现思路

[0003]为解决上述问题，本专利技术提供了一种基于GOx@GA@MIL
‑
101快速简便识别葡萄糖的方法，样品数量远超于传统方法，同时其检测样品不需要预处理，比以往的传统方法提高了检测效率，且人体内其他小分子对其检测并不产生影响，对葡萄糖的检测具有专一性。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种基于GOx@GA@MIL
‑
101快速简便识别葡萄糖的方法，以交联法将GOx固定于MIL
‑
101（Fe）表面，然后将模拟类过氧化物酶MIL
‑
101（Fe）与天然葡萄糖氧化酶（GOx）进行串联催化协同氧化，从而实现过氧化氢和葡萄糖的共识别；具体的：包括如下步骤：S1、制备MIL
‑
101：取0.675gFeCl3·
6H2O和0.206g对苯二甲酸置于烧杯中，经15mLN，N
‑<br/>2甲基甲酰胺溶解，在室温下超声搅拌15min,转移至25mL聚四氟乙烯反应釜中，110℃下反应20h后，将反应釜降至室温，将得到的产品以乙醇离心反复洗涤3
‑
4次，60℃烘干6h，以玛瑙研钵研磨至粉末状备用；S2、将10mg葡萄糖氧化酶（GOx）分散在10mL磷酸盐缓冲液中，室温下在磁力搅拌器中分散30min后，加入2.5wt%的戊二醛水溶液（GA），交联，得交联酶；S3、取50mg制备好的MIL
‑
101，分散到10mL配置好的磷酸盐缓冲液中，室温磁力搅拌分散30min，使之充分分散后，加入所得的交联酶，室温下与MIL
‑
101交联1h后,以PBS洗涤未交联上的载体或酶，离心收集，转移至预先制冷的冷冻干燥机内干燥6h，得到GOx@GA@MIL
‑
101，置于
‑
20℃冰箱内冷藏备用；S4、取30mg制备好的MIL
‑
101分散于10mL水中，体系中加入1mLPBS缓冲液，850μLTMB，50μL不同浓度的H2O2，50μL浓HCl，在45℃条件下水浴加热，反应30s，将得到的变色样品置于452nm条件下检测得到吸光度值，以H2O2浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，进行二次拟合，得到浓度在1.125x10
‑6‑
8.8x10
‑4mol/L的H2O2检测范围；S5、取30mg制备好的GOx@GA@MIL
‑
101分散于10mLPBS中，体系中加入1mLPBS缓冲液，850μLTMB，50μL不同浓度的葡萄糖（Glu），50μL浓HCl，在45℃条件下水浴加热，反应30s，将得到的变色样品置于452nm条件下检测得到吸光度值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值
为纵坐标，进行线性拟合，得到浓度在1
‑
10 mM/L的Glu检测范围。
[0005]上述方案中，将模拟类过氧化物酶MIL
‑
101（Fe）与天然葡萄糖氧化酶（GOx）结合，将二者进行串联催化协同氧化，从而达到对识别过氧化氢和葡萄糖共识别的目的；与其他铁基催化剂相比，具有更小的Km值，对底物有更高的亲和力，从而可以实现底物的快速识别；通过交联葡萄糖氧化酶对葡萄糖达到专一识别，不受其他小分子干扰。
附图说明
[0006]图1为交联葡萄糖氧化酶的实验操作及原理。
[0007]图2为MIL
‑
101对不同浓度过氧化氢的检测结果。
[0008]图3为GOx@GA@MIL
‑
101对不同浓度葡萄糖的检测结果。
[0009]图4为不同浓度葡萄糖与吸光度之间的线性关系。
[0010]图5为GOx@GA@MIL
‑
101对葡萄糖的识别专一性结果。
[0011]图6为实验流程及原理示意图。
[0012]图7为比色原理化学反应方程式。
具体实施方式
[0013]为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
实施例
[0014]S1、制备MIL
‑
101：取0.675gFeCl3·
6H2O和0.206g对苯二甲酸置于烧杯中，经15mLN，N
‑
2甲基甲酰胺溶解，在室温下超声搅拌15min,转移至25mL聚四氟乙烯反应釜中，110℃下反应20h，待反应结束后，将反应釜降至室温，将得到的产品以乙醇离心反复洗涤3
‑
4次，60℃烘干6h，以玛瑙研钵研磨备用；S2、将10mg葡萄糖氧化酶（GOx）分散在10mL磷酸盐缓冲液中，室温下在磁力搅拌器中分散30min后，向其中加入2.5wt%的戊二醛水溶液（GA），开始交联，示意图1所示。
[0015]S3、取50mg制备好的MIL
‑
101，分散到10mL配置好的磷酸盐缓冲液中，室温磁力搅拌分散30min，使之充分分散后，将制备好的交联酶加入，室温下与MIL
‑
101交联1h后,以PBS洗涤未交联上的载体或酶，离心收集，转移至预先制冷的冷冻干燥机内干燥6h，得到GOx@GA@MIL
‑
101，置于
‑
20℃冰箱内冷藏备用。
[0016]S4、取S2制备好的MIL
‑
101取30mg分散于10mL水中。体系中加入1mLPBS缓冲液，850μLTMB，50μL不同浓度的H2O2，50μL浓HCl，在45℃条件下水浴加热，反应30s，将得到的变色样品置于452nm条件下检测得到吸光度值。以H2O2浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，进行二次拟合，得到浓度在1.125x10
‑6~8.8x10
‑4mol/L的H2O2检测范围，如图2所示：S5、取S3制备好的GOx@GA@MIL
‑
101 30mg分散于10mLPBS中。体系中加入1mLPBS缓冲液，850μLTMB，50μL不同浓度的葡萄糖（Glu），50μL浓HCl，在45℃条件下水浴加热，反应30s，将得到的变色样品置于452nm条件下检测得到吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光
度值为纵坐标，进行线性拟合，得到浓度在1
‑
10 mM/L的Glu检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于GOx@GA@MIL
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101快速简便识别葡萄糖的方法，其特征在于：以交联法将GOx固定于MIL
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101（Fe）表面，然后将模拟类过氧化物酶MIL
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101（Fe）与天然葡萄糖氧化酶（GOx）进行串联催化协同氧化，从而实现过氧化氢和葡萄糖的共识别。2.如权利要求1所述的一种基于GOx@GA@MIL
‑
101快速简便识别葡萄糖的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、制备MIL
‑
101：取0.675gFeCl3·
6H2O和0.206g对苯二甲酸置于烧杯中，经15mLN，N
‑
2甲基甲酰胺溶解，在室温下超声搅拌15min,转移至25mL聚四氟乙烯反应釜中，110℃下反应20h后，将反应釜降至室温，将得到的产品以乙醇离心反复洗涤3
‑
4次，60℃烘干6h，以玛瑙研钵研磨至粉末状，备用；S2、将10mg葡萄糖氧化酶（GOx）分散在10mL磷酸盐缓冲液中，室温下在磁力搅拌器中分散30min后，加入2.5wt%的戊二醛水溶液（GA），交联，得交联酶；S3、取50mg制备好的MIL
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101，分散到10mL配置好的磷酸盐缓冲液中，室温磁力搅拌分散30...

【专利技术属性】
技术研发人员：高雪川，张曼，
申请(专利权)人：内蒙古工业大学，
类型：发明
国别省市：