菰黑粉菌T-DNA突变体库的构建和插入位点分析方法技术

菰黑粉菌T

【技术实现步骤摘要】
菰黑粉菌T
‑
DNA突变体库的构建和插入位点分析方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及菰黑粉菌T
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DNA突变体库的构建和插入位点分析方法。

技术介绍

[0002]菰黑粉菌（Ustilago esculenta）属于担子菌门黑粉菌纲黑粉菌科，其侵染菰草（Zizania latifolia）导致茎部组织细胞大量增殖膨大，最终形成可食用的茭白。茭白是我国的第二大水生蔬菜，其不仅味道鲜美，还含有丰富的蛋白质、维生素、粗纤维等，具有较高的营养价值和药用价值。然而，在茭白的种植过程中，由于栽培管理措施的不当、品种退化和外界环境条件的影响，田间经常出现不可孕茭的雄茭，严重影响了茭白的产量。研究认为，菰黑粉菌的侵染能力减弱或者丧失是造成田间雄茭形成的重要原因。因此，亟需对菰黑粉菌侵染能力的分子调控机制进行研究。目前，构建病原菌功能缺失突变体库是研究病原菌致病分子机理的有效手段，但菰黑粉菌中尚未见有相关报道。所以，构建并筛选分析菰黑粉菌功能缺失突变体库对研究其侵染能力的分子调控机制具有重要意义。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.菰黑粉菌T
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DNA突变体库的构建和插入位点分析方法，其特征在于包括以下步骤：1）从含50 μg/mL的利福平、卡那霉素和链霉素的三抗LB平板上挑取农杆菌单菌落接种于1mL三抗LB液体培养基中，于28℃、180rpm/min振荡培养2d后，按照1:100的比例重新接种于含100 μg/mL的AS 的IM液体培养基中，继续震荡培养5h，至农杆菌OD
600
为0.3
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0.5，备用；2）将液体摇培的菰黑粉菌TSP于2000 rpm/min离心收集菌体，并用无菌水洗涤3次，用血球计数板计数，调节浓度，将步骤1）中诱导培养后的农杆菌与菰黑粉菌TSP悬浮液1：1混匀，取100μL的混合液均匀涂布于含有AS的固体Co
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IM培养基上，于28℃黑暗下培养；3）将Co
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IM培养基上所长出的菌体用300μL无菌蒸馏水洗下，涂布于到含有G418的YEPS平板上，吹干，28℃培养2
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5d，直至平板上长出转化子菌落，将转化子分别转移到新的含有G418的YEPS平板上，继代培养2
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3d后，构建得到菰黑粉菌T
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DNA突变体库；4）取步骤3）构建得到的突变体菌株进行插入位点分析。2.如权利要求1所述的菰黑粉菌T
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DNA突变体库的构建和插入位点分析方法，其特征在于所述的步骤1）中农杆菌为农杆菌EHA105，带有双元载体pNeo3300，该质粒携带遗传霉素G418抗性基因。3.如权利要求1所述的菰黑粉菌T
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DNA突变体库的构建和插入位点分析方法，其特征在于所述的步骤1）中AS浓度为100μg/mL。4.如权利要求1所述的菰黑粉菌T
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DNA突...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤近天，叶子弘，杨芙容，张雅芬，夏文强，崔海峰，俞晓平，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：