特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性应用，属于烟草黄瓜花叶病毒防治技术领域。本发明专利技术利用RNA沉默的原理，利用PVY病毒自身CP基因提供了一种能够特异性抗PVY病毒的dsRNA，以及这种dsRNA的体外合成方法和在烟草PVY病毒防治时的应用方法；为烟草烟草马铃薯Y病毒防治提供新思路，避免了化学用药的诸多弊端；该方法简单有效，不存在转基因安全风险，更容易进行大田推广应用；后期可以结合细胞工厂化生产dsRNA，可为烟草病毒病防治提供一种简单、有效和廉价的新方法，也可为其它植物病毒病防治提供借鉴。供借鉴。供借鉴。

DsRNA with specific resistance to tobacco PVY virus and its in vitro synthetic primers and application to disease resistance

【技术实现步骤摘要】
特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性的应用


[0001]本专利技术属于烟草黄瓜花叶病毒防治
，特别是特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性应用。

技术介绍

[0002]烟草马铃薯Y病毒(Potato virus Y，以下简称PVY病毒)是我国烟草上的重要病害，每年造成的损失位列十大烟草侵染性病害名单前列。PVY病毒主要危害烟草、辣椒，番茄等茄科植物，属于系统性侵染病害。PVY侵染烟草时，会导致烟草的叶脉坏死、褐脉、黄斑，影响了烟叶的质量和产量。我国受PVY威胁烤烟面积年均300万亩(约20万公顷)。目前，烟草在种植、生产时，主要采取治虫防病、药剂防治等措施防治，防治效果不高。局部地区PVY暴发的情况仍然时有发生，PVY的防控仍然是烟叶生产中的一个热点和难点。
[0003]PVY病毒基因组编码一个大的多聚蛋白，长为360kD，进行翻译表达的过程中，包括经病毒自身编码的NIa、HC
‑
Pro、PI三种蛋白酶的第一蛋白(first protein，PI)，木瓜蛋白酶相似的辅助蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种体外合成权利要求1所述的特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA的引物对，其特征在于，正向引物PCP
‑
F的核苷酸序列为：5
’‑
GCAAATGACACAATCGATGC
‑3’
，反向引物PCP
‑
P的核苷酸序列为：5
’‑
TTGCCTAAGGGTTGGTTTTG
‑3’
。3.根据权利要求2所述的引物对，其特征在于，在所述正向引物和反向引物的5
’
端还均添加了T7启动子序列；添加了T7启动子序列的正向引物PCP
‑
T7F的核苷酸序列为：5
’‑
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGCAAATGACACAATCGATGC
‑3’
；添加了T7启动子序列的反向引物PCP
‑
T7P的核苷酸序列为：5
’‑
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGTTGCCTAAGGGTTGGTTTTG
‑3’
。4.权利要求1所述的特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA的体外合成方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、从感染PVY病毒的烟株叶片中提取烟草PVY病毒的总RNA，以总RNA为模板，反转录获得病毒样本的cDNA；S2、以步骤S1所得cDNA为模板进行PCR扩增，纯化回收目的片段；S3、将纯化回收的目的片段连接至载体上，再将载体加入感受态细胞中，培养扩增，挑取阳性克隆的CP蛋白，对C...

【专利技术属性】
技术研发人员：许汝冰，李锡宏，黎妍妍，
申请(专利权)人：湖北省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：