一种法夫酵母代谢产物的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种法夫酵母代谢产物的分析方法，其包括以下步骤：从法夫酵母发酵液中提取代谢物作为样品；对样品进行液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种法夫酵母代谢产物的分析方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种法夫酵母代谢产物的分析方法。

技术介绍

[0002]法夫酵母是Phaffia属的微生物，是一种极其重要的工业菌株，能够合成多种具备生物活性的天然产物。法夫酵母所产虾青素、脂肪酸、岩藻黄质、叶黄素等在食品保健、医疗、美容等方面具有较高的利用价值。
[0003]代谢物的定性一直是代谢组学的一大难点，由于法夫酵母代谢物复杂，传统微生物代谢数据库样本较少，导致法夫酵母代谢物定性不准确以及假阳性较高。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提出一种法夫酵母代谢产物的分析方法，该方法提高了检测的靶向性，克服了一般方法分析定性不精准的缺点，提高了检测灵敏度，无需同位素示踪，操作简单，适用性广泛。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的实施例在一方面提出了一种法夫酵母代谢产物的分析方法，其包括以下步骤：
[0006](1)从法夫酵母发酵液中提取代谢物作为样品；
[0007](2)对样品进行液相色谱
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电喷雾电离
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三重四级杆飞行时间质谱联用检测，获得质谱数据；
[0008](3)在MS
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Dial选择液质代谢组学数据库进行下载；
[0009](4)通过MS
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Dial对步骤(2)的质谱数据进行分析，获得总离子峰图；
[0010](5)将步骤(4)的总离子峰图与步骤(3)的数据库进行鉴定法夫酵母代谢产物。
[0011]根据本专利技术实施例的一种法夫酵母代谢产物的分析方法，该方法使用LC
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Qtof
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MS液质联用技术进行质谱，再将质谱数据转入MS
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Dial软件，选择All public MS/MS数据库对数据，通过质谱数据与数据库匹配进行分析，提高了检测的靶向性，克服了一般方法分析定性不精准的缺点；同时根据特异子离子的丰度对代谢物进行定量检测，极大提高了检测灵敏度，为研究法夫酵母天然活性代谢产物提供新思路新方法。
[0012]另外，根据本专利技术上述实施例提出的一种法夫酵母代谢产物的分析方法，还可以具有如下附加的技术特征：
[0013]可选地，步骤(5)中，通过总离子峰图中的质谱峰和保留时间与数据库进行匹配鉴定法夫酵母代谢产物。
[0014]可选地，步骤(2)中，液相色谱的操作条件是：进样量5～10μL，柱温25～35℃，流速0.2～0.4mL/min；色谱流动相A：0.1％甲酸水，B：乙腈；色谱梯度洗脱程序如下：0～1min，90％A；1～3min，A从90％线性变化至50％；3～6min，A从50％线性变化至10％；6～9min，A维持在10％；9～11min，A从10％线性变化至50％；11～12min，A从50％线性变化至90％。
[0015]可选地，步骤(2)中，电喷雾电离是采用正离子模式和负离子模式进行检测。
[0016]可选地，步骤(2)中，ESI源条件为：毛细管电压：3～3.30kV；采样锥：40；震源偏移：80；源温度：100℃；脱溶剂温度：250～300℃；气帘气流量：50L/H；脱溶剂气流量：59850L/H；正离子扫描m/范围：50～1200Da；负离子扫描m/z范围：50～1200Da。
[0017]可选地，还包括步骤(6)使用L
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谷氨酸、咪唑、葡萄糖、蔗糖标准品对仪器和软件校准。
[0018]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0019]图1为根据本专利技术实施例的法夫酵母代谢物在甲酸水(0.01％甲酸)做流动相以正离子、灵敏度模式检测条件下的总离子流图；
[0020]图2为根据本专利技术实施例的法夫酵母代谢物在甲酸水(0.01％甲酸)做流动相以负离子、灵敏度模式检测条件下的总离子流图；
[0021]图3为根据本专利技术实施例的法夫酵母代谢物在负离子模式下通过MS
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Dial软件处理的总离子峰图；
[0022]图4为根据本专利技术实施例的法夫酵母代谢物在正离子模式下通过MS
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Dial软件处理的总离子峰图；
[0023]图5为根据本专利技术实施例的负离子模式法夫酵母代谢物质谱数据与MS
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Dial负离子数据库比对定性物质；
[0024]图6为根据本专利技术实施例的正离子模式法夫酵母代谢物质谱数据与MS
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Dial正离子数据库比对定性物质；
[0025]图7为根据本专利技术实施例的L
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谷氨酸标品质谱图；
[0026]图8为根据本专利技术实施例的咪唑标品质谱图；
[0027]图9为根据本专利技术实施例的葡萄糖标品质谱图；
[0028]图10为根据本专利技术实施例的蔗糖标品质谱图。
具体实施方式
[0029]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的技术方案。应理解，本专利技术提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。
[0030]为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然显示了本专利技术的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0031]本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0032]发酵培养基：葡萄糖20g/L,磷酸二氢钾1.0～1.5g/L，氯化钠0.1～0.3g/L，七水硫
酸镁0.5～0.8g/L，二水氯化钙0.1～0.3g/L，酵母粉0.2～0.4g/L，PH＝6。
[0033]下面参考具体实施例，对本专利技术进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本专利技术。
[0034]实施例
[0035]代谢物提取：
[0036]JMU
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MVP14法夫酵母菌株以9％的接种量至发酵培养基中发酵5天后，经离心液氮研磨后，称取80mg～100mg，加入200μL预冷水和800μL预冷的甲醇/乙腈(1:1，v/v)，混匀，冰浴中超声60min，
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20℃孵育1h沉淀蛋白，16000g、4℃离心20min，取上清。上清在高速真空浓缩离心机挥干，获得样品。
[0037]样品检测：
[0038]质谱检测时，向上述挥干获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种法夫酵母代谢产物的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从法夫酵母发酵液中提取代谢物作为样品；(2)对样品进行液相色谱
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电喷雾电离
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三重四级杆飞行时间质谱联用检测，获得质谱数据；(3)在MS
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Dial选择液质代谢组学数据库进行下载；(4)通过MS
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Dial对步骤(2)的质谱数据进行分析，获得总离子峰图；(5)将步骤(4)的总离子峰图与步骤(3)的数据库进行鉴定法夫酵母代谢产物。2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤(5)中，通过总离子峰图中的质谱峰和保留时间与数据库进行匹配鉴定法夫酵母代谢产物。3.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤(2)中，液相色谱的操作条件是：进样量5～10μL，柱温25～35℃，流速0.2～0.4mL/min；色谱流动相A：0.1％甲酸水，B：乙腈；色谱梯度...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志朋，杨亮，李清彪，杨昊翌，姜泽东，倪辉，朱艳冰，杜希萍，郑明静，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：