识别抗RS病毒的抗体、以及使用了该抗体的免疫测定方法及免疫测定仪器技术

本申请提供一种灵敏度高的抗RS病毒抗体、以及使用了该抗体的检查试剂。一种抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含序列号1所表示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含序列号2、3或4所表示的氨基酸序列。3或4所表示的氨基酸序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】识别抗RS病毒的抗体、以及使用了该抗体的免疫测定方法及免疫测定仪器


[0001]本专利技术涉及RS病毒的免疫测定方法和免疫测定仪器以及用于该测定方法和该仪器的抗RS病毒抗体。

技术介绍

[0002]单克隆抗体由于仅识别特定的抗原，因此正在被广泛地用于该特定的抗原的检测。在RS病毒(respiratory syncytial virus，呼吸道合胞病毒)的包膜中存在作为糖蛋白的G蛋白和与细胞融合相关联的F蛋白(非专利文献1)。已知G蛋白在RS病毒的亚型(A型、B型)间氨基酸序列的差异大(非专利文献1)。另一方面，已知F蛋白即使在RS病毒的亚型(A型、B型)间氨基酸序列的差异也小，大量的RS病毒检查试剂盒检测出了F蛋白。然而，仅通过提高抗体对F蛋白的亲和性，很难开发显示足以能够无遗漏地检测临床分离株这样的实用的阳性检测率的RS病毒检查试剂盒(专利文献1)。
[0003]另外，RS病毒的N蛋白也称为核蛋白，由391个氨基酸残基构成。N蛋白是被称为核衣壳的核糖核蛋白复合物的构成部分，它围绕着RS病毒的基因组RNA并形成螺旋结构。已知N蛋白在RS病毒的亚型(A型、B)间氨基酸序列的差异最小。然而，仅用针对N蛋白的抗体无遗漏地检测临床分离株这点是非常困难的，在能够无遗漏地检测临床分离株这样的RS病毒检查试剂盒的开发中，需要混合针对F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体(专利文献1)。
[0004]现有技术文献
[0005]专利文献
[0006]专利文献1日本专利第6454274号公报
[0007]非专利文献
[0008]非专利文献1Collins PL and Karron RA.Respiratory syncytial virus.In:Knipe DM et al.，eds.Fields Virology，6th ed.Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia:pp 1086
‑
1123(2013).

技术实现思路

[0009]目前，正在销售使用了各种抗RS病毒抗体的检查试剂。但是，在利用这些以往的RS病毒检查试剂进行了RS病毒的检测时，灵敏度不够。
[0010]鉴于上述现状，本专利技术的目的在于提供一种灵敏度高的抗RS病毒抗体、以及使用了该抗体的检查试剂。
[0011]本专利技术人等发现，为了在判定部位高效地捕捉样本中所含有的RS病毒而提高免疫色谱装置的灵敏度，通过使用针对RS病毒的N蛋白(核蛋白)的抗体而能够提高RS病毒的检测灵敏度，从而完成了本专利技术。
[0012]即，本专利技术如下所述。
[0013][1]一种抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，包含重链可变区和轻链
可变区，所述重链可变区包含由序列号1所表示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含序列号2、3或4所表示的氨基酸序列。
[0014][2]一种抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，包含：重链可变区，包含具有与序列号1所表示的氨基酸序列90％以上的序列同一性的氨基酸序列，并具有对RS病毒N蛋白的结合活性；以及轻链可变区，包含具有与序列号2、3或4所表示的氨基酸序列90％以上的序列同一性的氨基酸序列，并具有对RS病毒N蛋白的结合活性。
[0015][3]根据[1]或[2]的抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，其中，抗原结合性片段是选自由Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、单链抗体(scFv)、dsFv、双特异性抗体(diabody)和微型抗体(minibody)构成的组中的肽片段。
[0016][4]一种RS病毒检测用试剂，包含[1]～[3]中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合性片段。
[0017][5]根据[4]所述的RS病毒检测用试剂，其为免疫色谱法试剂。
[0018][6]一种RS病毒检测用试剂盒，包含[1]～[3]中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合性片段。
[0019][7]一种RS病毒检测方法，使用[1]～[3]中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合性片段通过免疫学检测法进行检测。
[0020][8]根据[7]所述的方法，其是免疫色谱法。
[0021]本说明书包含作为本申请的优先权的基础的日本专利申请号2019
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204630号的公开内容。
[0022]专利技术的效果
[0023]本专利技术的方法由于在免疫测定中使用抗RS病毒N蛋白抗体，因此灵敏度高。另外，通过本专利技术，提供用于本专利技术的新型检测方法的免疫测定仪器和单克隆抗体。
具体实施方式
[0024]通过本专利技术的方法检测的被检对象为RS病毒，使用将N蛋白识别为抗原的单克隆抗体。
[0025]在本专利技术的方法中，使用将N蛋白识别为抗原的单克隆抗体或其抗原结合性片段进行免疫测定。在此，“识别”是指进行特异性反应、即抗原抗体反应这样的意思。“特异性”是指，在蛋白质与该抗体互相混合的液体体系中，该抗体不会与抗原的蛋白质成分在能够检测出的水平上发生抗原抗体反应、或者即使发生了某些结合反应或缔合反应也仅发生比该抗体与抗原的抗原抗体反应明显弱的反应。
[0026]本专利技术的方法也可以使用以本专利技术的单克隆抗体为基础而仅使抗原结合部位分离出的抗原结合性片段。即，在使用通过公知的方法制作的、与RS病毒的N蛋白结合的Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、单链抗体(scFv)、dsFv、diabody、minibody等具有特异性抗原结合性的片段(抗原结合性片段)的情况下，这些片段也包含在单克隆抗体中，包括在本专利技术的范围内。另外，单克隆抗体的类别并不限定于IgG，也可以是IgM或IgY。
[0027]本专利技术的方法中使用的单克隆抗体可以通过下述过程得到：使用公知的免疫学方法，用包含目标抗原的复合物或提取物、或者抗原或它们的部分肽对被免疫动物进行免疫，使用被免疫动物的细胞制作杂交瘤。用于免疫的肽的长度不作特别限定，优选使用5个氨基
酸以上、更优选使用10个氨基酸以上的肽作为免疫原。免疫原也可以从培养液获得，但也可以通过将编码任意抗原的DNA嵌入质粒载体中并将该载体导入宿主细胞使其进行表达而获得。作为免疫原的任意的抗原或其部分肽也可以表达为与在以下例示这样的蛋白质的融合蛋白，并在精制后或未精制的状态下用作免疫原。融合蛋白的制作可以利用本领域技术人员一般用作“蛋白质表达/精制标签”的谷胱甘肽S
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转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、硫氧还蛋白(TRX)、Nus标签、S标签、HSV标签、FRAG标签、多组氨酸标签等。与这些蛋白质的融合蛋白优选使用消化酶将任意的抗原或其部分肽部分和除此以外的标签部分切断，并在进行了分离精制之后用作免疫原。
[0028]从经免疫的动物进行单克隆抗体的制备可以通过众所周知的Kohler等人的方法(Kohler et al.，N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含序列号1所表示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含序列号2、3或4所表示的氨基酸序列。2.一种抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，包含：重链可变区，包含具有与序列号1所表示的氨基酸序列90％以上的序列同一性的氨基酸序列，并具有对RS病毒N蛋白的结合活性；以及轻链可变区，包含具有与序列号2、3或4所表示的氨基酸序列90％以上的序列同一性的氨基酸序列，并具有对RS病毒N蛋白的结合活性。3.根据权利要求1或2所述的抗RS病毒N蛋白单克隆抗体或其抗原结合性片段，其中，抗原结合性片段是选自由Fab、Fab
’...

【专利技术属性】
技术研发人员：桑原三和，
申请(专利权)人：电化株式会社，
类型：发明
国别省市：