鸡DEC-205特异性结合的噬菌体展示多肽VS及其用途制造技术

鸡DEC

【技术实现步骤摘要】
鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS及其用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS及其用途。

技术介绍

[0002]树突状细胞(dendritic cells，DCs)是专职抗原呈递细胞，通过靶向树突状细胞的生物免疫疗法可有效地将药物输送至相应的部位，能够减少用药剂量和给药次数，提高药物的治疗效果以及降低不良反应。已有研究表明，利用噬菌体展示线性12肽库技术筛选获得了一种人外周血DCs靶向肽，将其与抗原融合表达后，获得了较好的免疫效果(Curiel T J,Morris C,Brumlik M,et al.Peptides identified through phage display direct immunogenic antigen to dendritic cells[J].Journal of Immunology,2004,172(12):7425
‑
7431.)。
[0003]将抗原靶向DCs表面的内吞受体是增强获得性免疫反应的新策略。已有研究表明，利用原核表达抗原(新城疫病毒血凝素
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神经氨酸酶)与抗鸡DEC
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205抗体单链可变区融合蛋白，免疫后，融合抗鸡DEC
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205抗体单链可变区的免疫组产生的中和抗体滴度更高(Shrestha A,Sadeyen J R,Lukosaityte D,et al.Targeting Haemagglutinin Antigen of Avian Influenza Virus to Chicken Immune Cell Receptors Dec205 and CD11c Induces Differential Immune
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Potentiating Responses[J].Vaccines,2021,9(7):784.)。
[0004]截至目前，能够特异性结合鸡骨髓源DCs受体DEC
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205的优势多肽还未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS及其用途，以填补禽类靶向性疫苗领域中关于特异性结合鸡骨髓源DCs受体DEC
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205的优势多肽的空白。
[0006]本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS，其氨基酸序列为ValSerProAlaTrpAspAlaArgThrArgSerAla。
[0008]作为优选的实施方式，编码该噬菌体展示多肽VS氨基酸序列的核苷酸序列为GTTTCTCCTGCTTGGGATGCGAGGACTAGGAGTGCT。
[0009]作为优选的实施方式，该噬菌体展示多肽VS是通过针对鸡骨髓源DCs受体DEC
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205的三个C型凝集素样结构域设计信号肽，与三个C型凝集素样结构域、人IgG1 Fc和his标签融合表达于293t细胞，鉴定并纯化鸡DEC
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205重组蛋白后，利用噬菌体线性12肽库技术筛选而得。
[0010]作为优选的实施方式，所述三个C型凝集素样结构域分别为CTLD
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4、CTLD
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5和CTLD
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6。
[0011]作为优选的实施方式，所述信号肽的核苷酸序列为ATGGCTTCACCTCTCACAAGATTCTTGTCTCTG AACCTCCTGCTTCTCGGTGAATCAATTATCCTGGGTTCTGGCGAGGCT，其氨基酸序列为MetAlaSerProLeuThrArgPheLeuSerLeuAsnLeuLeuLeuLeuGlyGluSerIleIleLeuGlySerGlyGluAla。
[0012]作为优选的实施方式，该噬菌体展示多肽VS能与鸡DEC
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205重组蛋白特异性结合。
[0013]作为优选的实施方式，该噬菌体展示多肽VS能与鸡骨髓源DCs结合。
[0014]本专利技术的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS在作为药物输送载体中的应用。
[0015]本专利技术的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS在作为鸡骨髓源DCs靶向性疫苗佐剂中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017]本专利技术所筛选的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS(ValSerProAlaTrpAspAlaArgThrArgSerAla)，其相对分子质量小，其合成、表达及修饰等易于实现。经试验证明，该鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS能够特异性结合鸡DEC
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205重组蛋白；并且该鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS与表达鸡DEC
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205重组蛋白的293t细胞的结合能力较强；该鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS能与鸡骨髓源DCs较好的结合。
[0018]本专利技术所筛选的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS，可与多种药物输送载体联合使用，同时可作为疫苗佐剂制备鸡骨髓源DCs靶向性疫苗，可提高鸡骨髓源DCs靶向性疫苗免疫效果。
附图说明
[0019]图1为pcDNA3.1
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DEC 205
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Fc
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his重组表达质粒的酶切鉴定结果。图中，1：Marker；2：NheI
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NotI双酶切质粒；3：pcDNA3.1
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DEC 205
‑
Fc
‑
his重组表达质粒。
[0020]图2为pcDNA3.1
‑
Fc
‑
his重组质粒的酶切鉴定结果。图中，1：NheI
‑
NotI双酶切质粒；2：pcDNA3.1
‑
Fc
‑
his重组质粒；3：Marker。
[0021]图3为重组质粒转染24h、48h后的细胞裂解液和细胞上清的westernblot鉴定结果(ECL显色)
[0022]图4为重组质粒转染后的细胞上清的westernblot鉴定结果(DAB显色)。
[0023]图5为重组质粒与不同体积转染试剂转染48h后的样品western blot鉴定结果(ECL显色)。图中，Fc为人IgG1 Fc，蛋白大小约30kD，DEC
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Fc为鸡DEC 205的3个C型凝集素样结构域CTLD
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4、CTLD<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS，其特征在于，其氨基酸序列为ValSerProAlaTrpAspAlaArgThrArgSerAla。2.根据权利要求1所述的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS，其特征在于，编码该噬菌体展示多肽VS氨基酸序列的核苷酸序列为GTTTCTCCTGCTTGGGATGCGAGGACTAGGAGTGCT。3.根据权利要求1所述的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS，其特征在于，该噬菌体展示多肽VS是通过针对鸡骨髓源DCs受体DEC
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205的三个C型凝集素样结构域设计信号肽，与三个C型凝集素样结构域、人IgG1 Fc和his标签融合表达于293t细胞，鉴定并纯化鸡DEC
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205重组蛋白后，利用噬菌体线性12肽库技术筛选而得。4.根据权利要求3所述的鸡DEC
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205特异性结合的噬菌体展示多肽VS，其特征在于，所述三个C型凝集素样结构域分别为CTLD
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4、CTLD
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5和CTLD
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6。5.根据权利要求3所述的鸡DEC
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【专利技术属性】
技术研发人员：马孙婷，王晓丽，欧阳伟，吕立新，徐彬，钱晶，王永山，毕振威，诸玉梅，夏兴霞，王晶宇，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：