一种利用细胞核荧光染料定量监测细菌增殖及追踪其在肠内定植的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用细胞核荧光染料定量监测细菌增殖及追踪其在肠内定植的方法，包括如下步骤：a)染色溶液的配制；b)细菌的复苏；c)以细胞核荧光染料染细菌；d)细菌生长曲线的绘制；e)体外细菌增殖模型的建立；f)体内细菌增殖与定植的定量测定。本发明专利技术的一种利用细胞核荧光染料实现对细菌的定量分析，通过对细菌平均荧光强度和细菌数量的测定，建立了细菌增殖模型，并利用对这一方法，探索益生菌在小鼠肠道内增殖与定植。肠道内增殖与定植。肠道内增殖与定植。

A method for quantitatively monitoring bacterial proliferation and tracking its colonization in the intestine by using nuclear fluorescent dyes

【技术实现步骤摘要】
一种利用细胞核荧光染料定量监测细菌增殖及追踪其在肠内定植的方法


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种利用细胞核荧光染料定量监测细菌增殖及追踪其在肠内定植的方法。

技术介绍

[0002]微生物无处不在，是世界正常运转、人类生存不可缺少的。微生物包含了细菌、病毒、真菌等，其中，细菌是所有生物中数量最多的一类。细菌与人类健康密切相关。一方面，细菌是许多疾病的病原体，并可通过接触、消化道、呼吸道等在正常人群中传播疾病，另一方面，人类也与细菌和谐共处。人的肠道栖息的细菌占肠道微生物总量的90％，定植有400～500种不同的细菌，其数量约是人体细胞数量的10倍左右。众多研究表明肠道内的菌群对人体的健康、正常的生理代谢有着重要的作用。肠道微生物以一定比例组合，各菌种之间相互制约相互依存，维持肠道的稳定性。细菌主要以无性二分裂方式，即细菌生长到一定时期，在细胞中间逐渐形成横隔，由一个母细胞分裂为两个大小相等的子细胞。肠道内细菌通过不断增殖维持着肠道黏膜屏障的稳定，抑制病原体的侵袭。尽管关于肠道细菌的研究越来越多，然而，关于其作用机制的研究仍暂不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用细胞核荧光染料定量监测细菌增殖及追踪其在肠内定植的方法，其特征在于包括如下步骤：a)染色溶液的配制：在细胞核荧光染料中加入ddH2O配置10mg/ml储液，用PBS按照1:1000稀释储液至浓度为10μg/mL的工作液；b)细菌的复苏：将保存菌种1:100接种至10mL LB液体培养基中，37℃恒温摇床200r/min振荡12h，收集菌液，以5000rpm速度离心5min，弃上清，沉淀用1000μL PBS缓冲液重悬；c)以细胞核荧光染料染细菌：将荧光染料配制成工作浓度为15μg/mL的染液；将染液与培养基中的细菌悬液以10:1混合，然后置于37℃摇床中孵育30min，完成染色；重新离心并用PBS重悬，洗去多余的荧光染料；d)细菌生长曲线的绘制：将菌种1:100接种至200mL LB液体培养基中，37℃恒温摇床200r/min振荡，在0小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、9小时、12小时、15...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂飚，郁冰清，林创珍，杨玉平，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：