【技术实现步骤摘要】
一种利用基因编辑技术创制高类胡萝卜素甜玉米的方法
[0001]本专利技术涉及基因工程
,更具体的说是涉及一种利用基因编辑技术创制高类胡萝卜素甜玉米的方法。
技术介绍
[0002]甜玉米是食用玉米的主要来源,甜玉米根据遗传特性,可分为4种类型:普甜、超甜、脆甜和加强甜。其中,普甜受单隐性基因Zmsu1控制,其胚乳总含糖量是普通玉米的2
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3倍,且水溶性多糖(WSP)含量较高。甜玉米营养丰富,维生素、游离氨基酸和矿物质等含量较高,氨基酸组成较平衡,赖氨酸含量相当于高赖氨酸玉米。提高甜玉米的类胡萝卜素含量,可以有效增强甜玉米的营养品质。
[0003]类胡萝卜素是一类具有独特结构和功能的重要天然色素,在光养和非光养生物中广泛分布,目前已经有超过700种天然类胡萝卜素被鉴定,其化学多样性非常丰富。类胡萝卜素通过化学或酶转化成其他衍生物,如维生素A、植物激素或芳香类化合物等;维生素A缺乏症是全世界主要微量营养素缺乏症之一。研究表明富含类胡萝卜素的饮食(主要由水果和蔬菜组成)具有促进健康作用,同时有助于降低患某些癌症及心血管、眼睛、皮肤或骨骼疾病的风险。由于类胡萝卜素无法通过人体自身合成,而是在食物中与其他分子如糖类、蛋白质或脂肪酸相结合从而被人体摄取,因此研究人体从膳食中摄取及吸收类胡萝卜素的效率及其影响因素至关重要。
[0004]传统高胡萝卜素甜玉米材料的创制主要是通过回交转育的方法,往往需要经过6个回交世代,不仅耗时长,同时经常伴随基因冗余,导致一些非目标性状的导入,限制了改良材料的应 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用基因编辑技术创制高类胡萝卜素甜玉米的方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)针对基因Zmsu1、ZmIsa2设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA作用位点;所述sgRNA作用位点的核苷酸序列为:Zmsu1:5
’‑
GCCTTTGATGAACTGACGCACGG
‑3’
;SEQ ID NO.5;和ZmIsa2:5
’‑
GCGGAGATACGGACACACCGCGG
‑3’
;SEQ ID NO.6;(2)以pCBC
‑
MT1T2质粒为模板,MT1T2
‑
F,MT1T2
‑
F0,MT1T2
‑
R0,MT1T2
‑
R为引物,PCR扩增目的片段;所述引物序列如下:MT1T2
‑
F:5
’‑
AATAATGGTCTCAGGCGCCTTTGATGAACTGACGCA
‑3’
;SEQ ID NO.7;MT1T2
‑
F0:5
’‑
GCCTTTGATGAACTGACGCAGTTTTAGAGCTAGAAATAGC
‑3’
;SEQ ID NO.8;MT1T2
‑
R0:5
’‑
CGGTGTGTCCGTATCTCCGCGCTTCTTGGTGCC
‑3’
;SEQ ID NO.9;MT1T2
‑
R:5
’‑
ATTATTGGTCTCTAAACCGGTGTGTCCGTATCTCCG
‑3’
;SEQ ID NO.10;(3)针对基因ZmIsa3、ZmZpu1设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA作用位点;所述sgRNA作用位点的核苷酸序列为:ZmIsa3:5
’‑
ACCACGACGAAAGTTCAGAGCGG
‑3’
;SEQ ID NO.11;和ZmZpu1:5
’‑
TGGTCAGACTGAGAACAGCGCGG
‑3’
;SEQ ID NO.12;(4)以pCBC
‑
MT1T2质粒为模板,MT1T2
‑
F
’
,MT1T2
‑
F0
’
,MT1T2
‑
R0
’
,MT1T2
‑
R
’
为引物,PCR扩增目的片段;所述引物序列如下:MT1T2
‑
F
’
:5
’‑
AATAATGGTCTCAGGCGCCACGACGAAAGTTCAGAG
‑3’
;SEQ ID NO.13;MT1T2
‑
F0
’
:5
’‑
GCCACGACGAAAGTTCAGAGGTTTTAGAGCTAGAAATAGC
‑3’
;SEQ ID NO.14;MT1T2
‑
R0
’
:5
’‑
CGCTGTTCTCAGTC...
【专利技术属性】
技术研发人员:宋广树,吕庆雪,周迎鑫,孙蕾,周德龙,
申请(专利权)人:吉林省农业科学院,
类型:发明
国别省市:
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