抗IL-6抗体组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供抗IL

【技术实现步骤摘要】
抗IL
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6抗体组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及抗IL
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6抗体组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用，是抗IL
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6抗体与NVP
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BEZ235(磷酸肌醇
‑3‑
激酶
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雷帕霉素靶点小分子抑制剂)组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌位居癌症相关死亡数量最多的癌种前列，特别是肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)，几乎占据原发性肝癌全部病例的90％。肝癌治疗的选择有限、侵袭程度较高，早中期肝癌病人通常选择射频消融、肝切除、肝移植等局部治疗方式，对于晚期肝癌患者通常采用全身治疗，使用多激酶抑制剂索拉菲尼与仑伐替尼是当前主要的一线疗法。常规疗法虽然具有一定的抗肿瘤作用，但并不能显著改善其预后效果。
[0003]在过去的10余年中，多数药物并未表现出显著的生存获益。目前，肝细胞癌的治疗新方向包含分子靶向抑制剂联合治疗的策略，通过增强靶向药物的敏感性来达到更好的协同作用。因此，开发新的治疗策略为肝细胞癌的治疗提供了一定的参考价值。
[0004]磷酸肌醇
‑3‑
激酶
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雷帕霉素靶点抑制剂Dactolisib(NVP
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BEZ235)是一种双重ATP竞争性PI3K和mTOR抑制剂，目前正处于临床前Ⅰ/Ⅱ期试验阶段。药物毒性是小分子抑制剂面临的普遍挑战，许多接受PI3K抑制剂治疗的患者在之前的临床报道中，出现了肺炎、结肠炎、免疫相关毒性等不良反应。
[0005]在前期实验中显示单独给药能通过抑制肿瘤增殖发挥抗肿瘤效应，同时发现NVP
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BEZ235用药后会引起促炎性细胞因子IL
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6水平升高。炎症反应的发生与肿瘤的发展密切相关，细胞因子被认为是连接二者的关键介质。IL
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6已被证明能够促进多种肿瘤细胞的发生发展，同时大量临床样本显示，肝癌患者血清中IL
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6的含量与健康者相比显著升高，并伴随着较差的预后。针对这一发现，我们提出：靶向抑制IL
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6同时联合使用NVP
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BEZ235治疗HCC的方案。对于分子靶向药物联合治疗的研究，一定程度上弥补了单药使用的不足，规避了药物毒性，达到增强NVP
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BEZ235抗肿瘤效果的目的。

技术实现思路

[0006]专利技术的目的是提供抗IL
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6抗体组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用，是抗IL
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6抗体与NVP
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BEZ235(磷酸肌醇
‑3‑
激酶
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雷帕霉素靶点小分子抑制剂)组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用，所述组合物由抗IL
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6抗体与NVP
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BEZ235组合，组合比例为10mg/kg：60mg/kg。所述药物由组合物与药用辅料制备。
[0007]本专利技术首先利用水动力转染法构建小鼠肝细胞癌模型，发现NVP
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BEZ235用药后IL
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6表达升高(图1)，根据肿瘤进程设计用药方案(图2)。实验证明，治疗后观察组合物治疗组小鼠的肝重/体重、最大肿瘤直径、肿瘤结节数明显下降(图3)，生存时间显著延长(图4)。组合物组治疗显著降低了肿瘤负荷(图5)。组合物组肝癌区域的Ki
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67阳性率显著降低(图6)。本专利技术组合物在降低NVP
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BEZ235用药产生副作用的同时，起到协同治疗肝细胞癌的目
的。所述组合物制备的药物可提高NVP
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BEZ235的治疗效果，并应用于肝细胞癌的治疗。
附图说明
[0008]图1为H&E检测不同处理组小鼠HCC组织中IL
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6的蛋白表达。
[0009]图2为不同治疗组小鼠HCC的构建及药物治疗过程。
[0010]图3为肿瘤负荷小鼠肝重/体重、最大肿瘤直径、肿瘤结节数的结果示意图。
[0011]图4为小鼠肿瘤负荷生存时间统计图。
[0012]图5为不同治疗组小鼠肝脏标本大体观和H&E染色情况。
[0013]图6为免疫组化检测小鼠荷瘤Ki
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67表达情况。
具体实施方式
[0014]本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。
[0015]实施例1通过构建小鼠肝细胞癌模型，并检测抗IL
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6抗体与NVP
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BEZ235组合物及荷瘤指标对荷瘤生存时间的影响。
[0016]1.构建小鼠肝细胞癌模型
[0017]1.1实验动物及主要材料：雄性纯系C57小鼠，体重20
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25g，购于上海斯莱科公司。
[0018]1.2方法：选取野生型C57小鼠，构建质粒诱导小鼠肝细胞癌(HCC)模型。按照C
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myc质粒：N
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ras质粒：SB质粒＝1:19:2的比例，将质粒加入到无菌的1
×
PBS中，配制成浓度为11μg/mL的质粒混合液；将8
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10周龄的小鼠称重，按照小鼠体重(g)的10％抽取相应体积(mL)的混合质粒溶液；将小鼠固定在静脉可视小鼠尾注固定器内，按压小鼠尾部至尾静脉充分暴露，在5
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9秒内用注射器将混合质粒注入小鼠体内；待小鼠状态恢复正常后归笼继续饲养。
[0019]2.实验结果。首先构建了小鼠肝细胞癌模型，与对照组小鼠相比，NVP
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BEZ235用药后会引起促炎性细胞因子IL
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6表达水平升高(图1)。不同药物治疗后(图2)，NVP
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BEZ235治疗组和IL
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6抗体治疗组能在一定程度上能够抑制HCC的肿瘤进程但十分有限。组合物治疗组小鼠与对照组小鼠相比，在肝重体重比、最大肿瘤直径和肿瘤结节数这些指标方面，组合物组显著降低(图3)。生存分析显示组合物组小鼠的荷瘤生存时间延长最显著(图4)。根据肝脏标本大体观和H&E染色情况显示，组合物治疗显著延缓了肿瘤进程(图5)。组合物组小鼠肿瘤区域Ki
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67显著降低(图6)。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗IL
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6抗体组合物在制备治疗肝细胞癌药物中的应用，其特征在于，所述组合物由抗IL
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6抗体与磷酸肌醇
‑3‑
激酶
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雷帕霉素靶点小分子抑制剂组成。2.根据权利要求1所述的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚渭华，苗小龙，王垚，姜源聪，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：