一种菌株及其微生态制剂和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种菌株及其微生态制剂和应用，所述的菌株B1的分类命名为胶红酵母，其菌落呈圆形，凸起，边缘整齐，不透明，表面光滑或较光滑，颜色呈粉红色，大约为3mm，扫描电镜下，细胞长度为2

【技术实现步骤摘要】
一种菌株及其微生态制剂和应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体为一种菌株及其微生态制剂和应用。

技术介绍

[0002]近年来养殖环境的污染问题、抗生素在养殖中的滥用等问题日益突出，导致养殖动物品质和食用安全性降低，影响人类健康。如今迫切需要寻找研发出绿色安全，对环境无污染，容易被动物吸收利用，营养健康的天然饲料。
[0003]红酵母富含有多种氨基酸和脂肪酸，具有丰富的营养，同时还含有多种生物活性成分，如亚麻酸、亚油酸和β－胡萝卜素等，并且，还可改善养殖环境。红树林蕴藏着大量的微生物种植资源，是陆地向海洋过渡的特殊生态系统。目前，从红树林根际微生物中筛选和挖掘了一批有潜在利用价值的微生物菌株资源。红酵母作为一类单细胞真核微生物，通过对红酵母的研究，发现其富含丰富的营养成分和不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、虾青素等多种生物活性物质，应用于饲料产品的前景广阔，是非常重要的真菌资源。
[0004]但是现有的菌株大多数研究侧重于促进海洋红酵母的类胡萝卜素合成、发酵工艺优化等方面，而在水产养殖应用方面则鲜少研究，因此我们选择红树林地区采集的微生物样品，对海洋红酵母进行初步分离、筛选、鉴定，得到纯化菌株，分析和评价红酵母菌株的营养成分，并进行发酵培养条件优化，最终将红酵母及衍生物制成水产饲料产品应用于水产养殖业中。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种菌株及其微生态制剂和应用，以解决上述
技术介绍
提出的现有的菌株大多数研究侧重于促进海洋红酵母的类胡萝卜素合成、发酵工艺优化等方面，而在水产养殖应用方面则鲜少研究的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术提供一种菌株，其分类命名为胶红酵母B1。
[0007]首先，提取菌株B1的DNA并扩增菌株的核糖体基因转录间隔区序列，经测定序列长度为588bp，在NCBI网站上进行网站下载与菌株B1密切相关的ITS序列，通过MEGA软件构建系统发育树。从利用近邻相接法构建的系统发育树可知，菌株B1和胶红酵母聚为一支，且具有高度的拓扑稳定性，自举支持率为99%，在利用最大似然法构建的系统发育树中，菌株B1和胶红酵母的关系同样被证实。
[0008]本专利技术的菌株B1在PDA培养基上的菌落形态一致，呈不透明的圆形，直径大约为3mm，菌落为粉红色，表面隆起、有光泽，边缘完整，扫描电镜观察下，菌株B1细胞长度2
‑
5um，球形，出牙生殖。
[0009]综上所述，通过菌落形态和ITS序列分析，菌株B1属于胶红酵母。
[0010]进一步的，所述改善生态养殖优良海洋红酵母添加剂的制备方法，包括如下步骤：（1）将所述胶红酵母B1接种于种子培养基中，30℃摇瓶培养3d，得到胶红酵母B1种
子液；（2）在50L发酵罐中加入20L所述的胶红酵母B1的最佳发酵培养基并灭菌40min，按摇瓶最适接种量1%将胶红酵母B1种子液接种于发酵罐中进行发酵，得到发酵菌液；（3）将所述发酵菌液于4℃、8000rpm条件下冷冻离心15min后，去除上清液，保留沉淀，静置沉淀10min后于4℃、8000rpm冷冻离心15min后，去除上清液，保留沉淀，静置沉淀10min后，于4℃、800rpm冷冻离心15min后，去除上清液，保留沉淀，所得沉淀即为红酵母菌剂；（4）将所述的红酵母菌剂于－10℃~
‑
50℃条件下冷冻干燥3d，3d后取出，碾磨后即得到红酵母冻干粉；（5）将红酵母冻干粉添加于基础饲料中，制成红酵母添加剂。
[0011]进一步的，所述步骤2发酵培养基组分为去皮马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，pH值自然。
[0012]进一步的，所述步骤（2）中的发酵条件为：温度设定为30℃，罐压设定为0.5公斤，pH值自然，发酵8h以上。
[0013]更近一步的，本专利技术提供了上述的红酵母添加剂的益生菌微生态制剂在罗非鱼饲料添加剂制剂中的应用。
[0014]进一步的，是应用于促进水产动物生长、提高水产动物生产性能方面。
[0015]进一步的，可以应用于提高鱼类的生产性能以及鱼类品质方面。
[0016]具体地，本专利技术中提高动物的生产性能指的是提高水产动物罗非鱼的增重率；改善水产动物罗非鱼品质值的是加深鱼肉色泽，并同时对谷丙转氨酶和谷草转氨酶以及超氧化物歧化酶活性有促进作用。
[0017]进一步的，所述红酵母饲料添加剂的使用添加量为0.5
‑
2%。
[0018]本专利技术公开的红酵母微生态制剂作为鱼类饲料添加剂，制备方法简单，没有特殊设备要求，添加量较少，可以直接加入动物的食品、药品、饲料或饮水中，添加过程方便快捷，具有很好的推广应用前景。
[0019]本专利技术经过罗非鱼饲养试验发现：用红酵母菌剂制备的生长促进剂可以使罗非鱼的平均体重显著提高了；可以改善罗非鱼品质，显著加深罗非鱼色泽；与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的红酵母菌株产生的氨基酸、脂肪酸、β－胡萝卜素的含量也比出发野生菌株明显提高。此外，该菌株还具有遗传性稳定、无致病性、无毒副作用、容易培养、繁殖速度快、菌株生物量多等有点，明显优于未添加红酵母菌株的市售基础饲料。
[0020]本专利技术的红酵母菌株显著提高水产动物幼苗的存活率、提高饲料效果和增强动物体的免疫功能、减少抗生素用量、皮肤和肌肉色泽鲜艳、口味好等特点。
附图说明
[0021]图1为胶红酵母B1在PDA培养基28℃培养3d的菌落形态（A）及菌株B1的扫描电镜观察（B）；图2为胶红酵母B1的系统发育树；
图3为胶红酵母B1的全基因组图谱；图4为胶红酵母的色素薄层色谱分析图，其中斑点1为菌株B1的色素提取液；斑点2为β－胡萝卜素标准品；斑点a和c，β－胡萝卜素，斑点b，圆酵母素；图5为胶红酵母B1的β－胡萝卜素提取液高效液相色谱分析（A）及β－胡萝卜素标准品高效液相色谱分析（B）；图6为胶红酵母B1的氨基酸组成；图7为胶红酵母B1的脂肪酸组成；图8为添加不同红酵母添加量对罗非鱼生长性能的影响；图9为试验4周后罗非鱼的免疫指标。
具体实施方式
[0022]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件；未注明的材料、试剂等，均未市售产品。除非另外说明，否则百分比和分数按重量计算。
[0024]请参阅图1
‑
9，本专利技术中所需要的培养基的配方如下：（1）筛选培养基：YEPD固体培养基：酵母粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，氯霉素终浓度100mg/L；PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菌株，其特征在于：所述菌株系胶红酵母B1，其菌落呈圆形，凸起，边缘整齐，不透明，表面光滑或较光滑，颜色呈粉红色，直径为2
‑
4mm，扫描电镜下，细胞长度为2
‑
5um，球形，出牙生殖，最适生长温度为28
‑
30℃。2.根据权利要求1所述的一种菌株，其特征在于：所述胶红酵母菌株B1在制备用于罗非鱼幼体存活生长影响的应用。3.根据权利要求2所述的胶红酵母菌株B1的应用，其特征在于：所述的罗非鱼幼体红酵母饲料的制备方法步骤如下：（1）将所述的胶红酵母B1接种于种子培养基中，摇瓶培养得到红酵母B1种子液；（2）在发酵罐中加入所述的红酵母B1的最佳...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文菲，王金子，姜明国，李金秋，潘思密，
申请(专利权)人：广西桂湾海洋科技有限公司，
类型：发明
国别省市：