一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法技术

一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，是以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。本发明专利技术制备的油茶籽粕多肽锌螯合物中含有17种氨基酸，其中具有7种必须氨基酸，油茶籽粕多肽与锌离子螯合率达到58.79%；具有优异的抗氧化能力，清除DPPH自由基能力达到97.4%，具有较好的生物活性，油茶籽粕多肽锌螯合物中锌离子释放率达到78.23%，透析率达到60.51%，具有较好的生物利用率。利用率。利用率。

【技术实现步骤摘要】
一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制品
，具体涉及一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法。

技术介绍

[0002]油茶籽粕(Camellia oleifera seed meal，COSM)是油茶籽提油后产生的一种副产物，但大部分的油茶籽粕资源被浪费，没有发挥其真正的价值。油茶籽粕中含有蛋白质10％～20％、粗脂肪0.5％～7％、粗纤维15％～25％、糖类30％～60％、茶皂素10％～14％等，油茶籽粕中糖类、粗蛋白、粗纤维等物质，能广泛应用于生物饲料、化工、轻工等行业。油茶籽粕中除丰富的茶皂素和多糖外，其中的蛋白含量也很丰富，含有18种氨基酸，且含有动物必需的10种氨基酸，但是由于其中含有大量具有溶血毒性的茶皂素，且茶皂素很难去除，制约了油茶籽粕中蛋白的应用，目前只在燃料，有机肥和一些禽畜饲料上有应用，有的甚至直接被当做垃圾丢掉，不仅没有对其进行充分利用，还给环境带来巨大负担。因此有效利用开发其副产物具有一定的实际意义。
[0003]锌作为人体必须的微量矿物质元素之一，被称为“生命元素”。其在维持人体正常的生命活动中起着重要作用，缺锌会使人的身体健康受到很大的影响，如儿童缺锌会对其生长发育造成影响，成人缺锌对其免疫功能，神经系统都有很大的影响。可见人体对补充吸收锌的重要性。人体对于锌的补充可通过摄入富锌食物或者是服用补锌剂。目前的补锌剂已经发展至第四代，为多肽螯合锌，是多肽与锌的结合物。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于提供一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法。
[0005]本专利技术目的通过如下技术方案实现：
[0006]一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，去除茶皂素后，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。
[0007]进一步，上述去除茶皂素是使用NKA
‑Ⅱ
树脂对油茶籽粕粗蛋白中茶皂素成分进行吸附，具体是将NKA
‑Ⅱ
树脂经去离子水充分浸泡溶胀后，装填于内径为12cm，长度为25cm的层析柱中，将浓度为20mg/mL油茶籽粕粗蛋白提取物溶液通过层析柱，流速为100mL/h，吸附完成后的蛋白提取液颜色变浅，呈微黄色。
[0008]在试验过程中发现，油茶籽粕多肽存在与锌离子螯合率较低的难点，且由于油茶籽粕中含有大量茶皂素，在提取蛋白时，茶皂素也被一起提取，导致提取的蛋白呈黑色，不仅色泽观感差，且大量的茶皂素的存在对人体危害较大。但是在去除茶皂素之后，水解形成多肽与锌离子螯合率较未去除茶皂素之前更低，且螯合后，生物活性下降。
[0009]本专利技术中采用对于油茶籽粕蛋白具有高水解度的风味蛋白酶优先降解，然后再采
用对油茶籽粕具有较低水解度的胰蛋白酶继续水解，通过复合水解获得多肽的氨基酸组成和序列中，具有更多的与锌离子具有较强结合能力的氨基酸，同时也调节了多肽表面的亲水基团数量及分布，引起了多肽表面局部电荷密度变化，增强了其与锌离子的结合能力，从而提高了油茶籽粕多肽与锌离子的螯合能力。
[0010]进一步，上述水解是将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5
‑
5g/mL的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶在45℃下进行水解2
‑
3h，然后灭酶，调节pH后，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5
‑
1h，加入的蛋白酶总量占底物质量的5
‑
7％，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1
‑
2:1。
[0011]进一步，上述多肽溶液的浓度为20mg/mL，硫酸锌溶液的浓度为20mg/mL，多肽溶液和硫酸锌溶液的体积比为5
‑
6:1，pH为7，螯合温度为55
‑
65℃，螯合时间为80
‑
100min。
[0012]进一步，上述提取蛋白是将预处理油茶籽粕粉末按照料液比为1g:25
‑
30mL加入NaOH溶液中，保持pH为9.3
‑
10，在70℃下提取45
‑
60min，然后离心，取上清液采用盐酸调节pH至4
‑
4.5，再次离心得沉淀，冷冻干燥。
[0013]进一步，上述预处理是将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75％的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末。
[0014]进一步，上述水浴是将多肽溶液pH调节至7，然后在45℃下进行水浴30
‑
40min。
[0015]进一步，上述超声处理的超声功率为100％，超声处理时间为15min。
[0016]最具体的，一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：
[0017]步骤1：提取油茶籽粕蛋白
[0018](1)预处理：将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75％的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末；
[0019](2)：将油茶籽粕粉末加入pH为9.3
‑
10的氢氧化钠溶液中，在70℃下水浴提取45
‑
60min，然后在8000rpm下离心20min，取上清液加入1mol/L的盐酸溶液，调节pH至4
‑
4.5，再在8000rpm下离心20min，取沉淀进行冷却干燥，得油茶籽粕蛋白，油茶籽粕和氢氧化钠溶液的用量比为1g：25
‑
30mL；
[0020]步骤2：水解制备多肽
[0021](1)使用NKA
‑Ⅱ
树脂对油茶籽粕粗蛋白中茶皂素成分进行吸附，具体是将NKA
‑Ⅱ
树脂经去离子水充分浸泡溶胀后，装填于内径为12cm，长度为25cm的层析柱中，将浓度为20mg/mL油茶籽粕粗蛋白提取物溶液通过层析柱，流速为100mL/h，吸附完成后的蛋白提取液颜色变浅，呈微黄色。
[0022](2)将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5
‑
5mg/L的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶，在45℃下水解2
‑
3h，然后灭酶，调节pH至8
‑
8.5，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5
‑
1h，加入的蛋白酶总量占蛋白质量的5
‑
7％，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1
‑
2:1；
[0023]采用截留分子量为3KDa的超滤膜对油茶籽粕蛋白水解液进行分离，控制蠕动泵转速为30
‑
40rpm，超滤膜出口压力为5.00Bar，收集过滤物，进行冷冻干燥；
[0024]步骤3：水浴及超声处理
[0025]将步骤2制备的多肽溶于水配制成浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，去除茶皂素后，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。2.如权利要求1所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述水解是将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5
‑
5g/mL的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶在45℃下进行水解2
‑
3h，然后灭酶，调节pH后，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5
‑
1h，加入的蛋白酶总量占底物质量的5
‑
7%，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1
‑
2:1。3.如权利要求1或2所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述多肽溶液的浓度为20mg/mL，硫酸锌溶液的浓度为20mg/mL，多肽溶液和硫酸锌溶液的体积比为5
‑
6:1，pH为7，螯合温度为55
‑
65℃，螯合时间为80
‑
100min。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述提取蛋白是将预处理油茶籽粕粉末按照料液比为1g:25
‑
30mL加入NaOH溶液中，保持pH为9.3
‑
10，在70℃下提取45
‑
60min，然后离心，取上清液采用盐酸调节pH至4
‑
4.5，再次离心得沉淀，冷冻干燥。5.如权利要求4所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述预处理是将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75%的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末。6.如权利要求1
‑
5任一项所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述水浴是将多肽溶液pH调节至7，然后在45℃下进行水浴30
‑
40min。7.如权利要求6所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述超声处理的超声功率为100%，超声处理时间为15min。8.一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张斯童，牛光有，张娜，高大明，李艳丽，王刚，陈欢，陈光，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：