一种复合生物饲料添加剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种复合生物饲料添加剂的制备方法及其应用，是基于黑曲霉定向酵解多重底物的特性，构建了益生元

【技术实现步骤摘要】
一种复合生物饲料添加剂的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于微生物饲料
，涉及饲用生物饲料添加剂，具体地说是一种复合生物饲料添加剂的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]饲用抗生素的使用在保障动物健康的同时，引发了严重的耐药性问题，从而导致使用剂量不断增大，造成终端肉蛋等产品中药残超标，进而引发严重的食品安全问题。因此，通过替抗、减抗实现动物健康养殖势在必行。
[0003]维护动物健康首要是维护肠道健康，而肠道健康又受到肠道微生物的制约。很多疾病的发生都伴随着肠道致病菌增多、益生菌减少的现象。富含益生元和益生菌的生物饲料可以有效调节肠道微生物，促进益生菌生长的同时，抑制病原菌滋生，因此受到动物养殖行业的高度关注。但是，当前益生元寡糖生产多采用化学降解的方法，成本高且易造成环境污染；益生菌尤其是需要厌氧培养的部分菌株，存在生长能力较弱，增殖困难的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的，旨在提供一种复合生物饲料添加剂的制备方法，以获得一种绿色环保、成本低、无耐药性的复合生物饲料添加剂；
[0005]本专利技术的另一个目的，旨在提供上述复合生物饲料添加剂的一种应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
[0007]一种复合生物饲料添加剂的制备方法，该方法包括依次进行的以下步骤：
[0008]S1.将黑曲霉种子液接种至含菊粉的培养液中进行培养，得体系A；
[0009]S2.将酿酒酵母进行高密度培养、诱导自溶，得体系B；
[0010]S3.将体系A和体系B混合反应，得体系C；
[0011]S4.将体系C添加至豆粕发酵培养基中进行发酵，得体系D；
[0012]S5.将植物乳杆菌种子液接种至体系D中，厌氧发酵，即得所述复合生物饲料添加剂。
[0013]作为一种限定，步骤S1中，所述菊粉添加量为1.5
‑
2.5％；
[0014]培养时间为36
‑
48h。
[0015]作为另一种限定，步骤S2中，所述酿酒酵母进行高密度培养前需要进行活化，高密度培养后菌体密度为50
‑
70g/L；
[0016]诱导自溶时间为18
‑
24h。
[0017]作为第三种限定，步骤S3中，所述体系A和体系B的体积比为2：3
‑
4；
[0018]混合反应时间为18
‑
24h。
[0019]作为第四种限定，步骤S4中，所述豆粕发酵培养基，包括豆粕40
‑
50份，麸皮5
‑
15份，玉米粉5
‑
10份，水40
‑
50份；
[0020]体系C与豆粕发酵培养基的质量比为2：3
‑
4；
[0021]发酵时间为24
‑
36h。
[0022]作为第五种限定，步骤S5中，所述植物乳杆菌的接种量为5
‑
10％；
[0023]所述厌氧发酵时间为24
‑
36h。
[0024]作为第六种限定，所述黑曲霉，产菊粉内切酶酶活力为11.3
‑
12.8U/ml。
[0025]作为第七种限定，所述复合生物饲料添加剂中植物乳杆菌活菌数为1.5
‑
9.5
×
109cfu/g，甘露寡糖含量0.35
‑
0.85％、菊粉寡糖0.25
‑
0.75％，小肽含量为0.95
‑
1.50％。
[0026]本专利技术还提供了上述复合生物饲料添加剂的一种应用，所述复合生物饲料添加剂是根据根据权利要求1
‑
8中任一项所述的复合生物饲料添加剂的制备方法制备的，用于添加至动物饲料中。
[0027]作为一种限定，所述动物包括鸡、羊和牛。
[0028]由于采用了上述技术方案，本专利技术与现有技术相比，所取得的技术进步在于：
[0029]①
本专利技术提供的复合生物饲料添加剂的制备方法，选用的黑曲霉可以生产由菊粉内切酶、甘露聚糖酶和蛋白酶组成的复合酶，经过第一阶段对菊粉的发酵获得产物果寡糖；经过与自溶酵母混合进行第二阶段发酵，利用复合酶定向酵解酵母细胞壁获得甘露寡糖；其次，与豆粕混合，将豆粕降解为小肽；果寡糖、甘露寡糖和小肽作为益生元最后与植物乳杆菌复配后制备出复合生物饲料添加剂；
[0030]②
本专利技术提供的复合生物饲料添加剂的制备方法，黑霉菌的产物促进了后续加入的益生菌
‑
植物乳杆菌的增殖，最终可获得富含益生元寡糖(果寡糖、甘露寡糖)与益生菌(植物乳杆菌、黑曲霉)以及豆粕小肽等功能性物质的复合生物饲料添加剂，实现了菌酶协同固态发酵；
[0031]③
本专利技术提供的复合生物饲料添加剂的制备方法，以菌代酶、定向酵解获得益生元寡糖，然后利用其促进后续厌氧益生菌的增殖，最终构建了新型的益生元
‑
益生菌复合生物饲料生产工艺；
[0032]④
本专利技术提供的复合生物饲料添加剂的制备方法，不涉及化学合成原料，天然绿色无污染、成本低且不会产生耐药性。
[0033]本专利技术适用于制备复合生物饲料添加剂，制备的复合生物饲料添加剂进一步应用于动物饲料中。
具体实施方式
[0034]下面通过具体实施例对本专利技术做进一步详细说明，应当理解所描述的实施例仅用于解释本专利技术，并不限定本专利技术。
[0035]实施例1一种复合生物饲料添加剂的制备方法
[0036]本实施例包括依次进行的以下步骤：
[0037]S1.取出实验室贮存的黑曲霉菌种(产菊粉内切酶酶活力为11.3U/ml)放在恒温培养箱中活化，在超净台上挑取菌种加入液体培养基，置于摇床(180r/min)上，于30℃培养84h，划线分离；
[0038]S2.挑取步骤S1中长势好的单个黑曲霉菌株，加入到盛有5ml蒸馏水灭菌试管中，摇匀后，吸取此溶液1ml加入含2％菊粉的察氏培养基中，于30℃无菌室摇床培养(180r/min)48h，得液体发酵液X；
[0039]S3.取步骤S2液体发酵液X，进行梯度稀释，稀释后的梯度依次为10
‑7、10
‑8和10
‑9，标记为发酵液Y1
‑
Y3，将发酵液Y1
‑
Y3中长势较好的黑曲霉菌株划线在以菊粉为唯一碳源的改良液体察氏培养基上培养38h，其中菊粉添加量为1.5％，培养温度为30℃，得体系A；
[0040]S4.将活化酿酒酵母菌种活化后转入YPD培养基中进行高密度培养，30℃培养24h，菌体密度为55g/L，然后进行诱导自溶18h，得体系B；
[0041]S5.将体系A和体系B以体积比1：1.5混合后，作用24h，得体系C；
[0042]S6.将体系C转入豆粕本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，该方法包括依次进行的以下步骤：S1.将黑曲霉种子液接种至含菊粉的培养液中进行培养，得体系A；S2.将酿酒酵母进行高密度培养、诱导自溶，得体系B;S3.将体系A和体系B混合反应，得体系C；S4.将体系C添加至豆粕发酵培养基中进行发酵，得体系D；S5.将植物乳杆菌种子液接种至体系D中，厌氧发酵，即得所述复合生物饲料添加剂。2.根据权利要求1所述的一种复合生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述菊粉添加量为1.5
‑
2.5%；培养时间为36
‑
48h。3.根据权利要求1所述的一种复合生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述酿酒酵母进行高密度培养前需要进行活化，高密度培养后菌体密度为50
‑
70 g/L;诱导自溶时间为18
‑
24h。4.根据权利要求1所述的一种复合生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述体系A和体系B的体积比为2：3
‑
4；混合反应时间为18
‑
24h。5.根据权利要求1所述的一种复合生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述豆粕发酵培养基，包括豆粕40
‑
50份，麸皮5
‑
15份，玉米粉5
‑
10份，水40

【专利技术属性】
技术研发人员：刘金龙，尹薪项，李天婵，卢玉谭，刘雨岳，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：