一种防治樟疫霉的方法技术

本申请公开了一种防治樟疫霉的方法，为利用桔黄假单胞菌ST

【技术实现步骤摘要】
一种防治樟疫霉的方法


[0001]本专利技术属于植物病害防治研究
，更具体地，涉及一种防治樟疫霉的方法。

技术介绍

[0002]樟疫霉(Phytophthora cinnamomi)是一种全世界广泛分布的重要植物病原菌，寄主范围较广，可侵染林木、果树、农作物和园林花卉等多种植物，引起枝枯、腐烂、溃疡、猝倒等症状(Hardham，2005)。由于其寄主范围广泛，目前已在68个国家的950多种寄主植物上分离得到(Hardham and Blackman，2018)。近年来，樟疫霉在澳大利亚西南地区森林迅速传播开来，已经严重威胁到当地自然生态系统以及生物多样性。在美国，疫霉根腐病(Phytophthora root rot)是杜鹃的一种破坏性病害，在受侵染的田间和容器苗生产区造成这种苗圃作物的大量损失(Weiland et al.，2020)。在地中海地区，樟疫霉引起的橡树大量死亡，严重威胁了地中海混交橡树林(Frisullo et al.，2018；G
ó
mez et al.，2020)。因此，寻求有效的樟疫霉防治策略迫在眉睫。但由于樟疫霉属于卵菌，其与真菌在遗传关系上具有较大的差异，因此樟疫霉引起的病害一旦发生，应用传统的杀真菌剂治理效果一直不理想。目前已经开发并应用了几种针对樟疫霉的杀菌剂，例如亚磷酸盐和乙磷铝等(Gonz
á
lez et al.，2019；Ros
á
rio et al.，2021)。然而，化学农药的频繁使用造成了日益严重的抗药性和环境污染。相比之下，使用微生物拮抗剂的生物控制作为管理植物病原体的化学防治的替代方式引起了相当大的兴趣(Jiang et al.，2015)。微生物制剂的其他优点包括控制时间长、耐药性低、易于开发和成本相对较低。因此，生物防治是植物病害防治的最佳策略之一(Zheng et al.，2011)。
[0003]假单胞菌(Pseudomonas)是自然界中分布最广泛的革兰氏阴性细菌之一，作为PGPR，假单胞菌可以通过产生和分泌嗜铁素、磷酸酶、植物激素等物质促进植物的生长；对病原菌的抑制作用则主要是通过产生一些抗生素类物质。据报道，荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)BRZ63能够在体外抑制立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)W70、炭疽菌(Colletotrichum dematium)K、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)K2291和燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)的生长，而且在盆栽试验中，还能刺激用真菌病原菌处理的油菜幼苗的萌发和生长(Chlebek et al.，2020)。绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)G05产生的硝吡咯菌素能抑制禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的菌丝生长(Huang et al.，2018)。
[0004]此外，微生物挥发性有机化合物(Volatile Organic Compounds，VOC)也引起了更多的关注。VOC是具有特定优势的关键生物防治因素，例如良好的膜渗透性、高扩散效率和广泛的拮抗作用(Morath et al.，2012)。低浓度的VOC可以被感知，因此它们除了直接抑制病原真菌的生长还能诱导植物的系统抗性(Cordero et al.，2014；Velivelli et al.，2015)。一个成功的生防菌通常需要激活多种代谢物来协同控制病原体，但之前的研究主要集中在单一种类的抗菌代谢物上，而不是多种类型的组合，因此还不能完全揭示其抗菌特性和机制而满足使用需求。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的不足，本申请所要解决的技术问题是提供一种防治樟疫霉的方法，使用桔黄假单胞菌(P.aurantiaca)ST
‑
TJ4作为一种有效的生物防治剂来控制樟疫霉。
[0006]为解决上述技术问题，本申请采用的技术方案为：
[0007]一种防治樟疫霉的方法，利用桔黄假单胞菌ST
‑
TJ4的代谢物对樟疫霉进行防治。
[0008]所述的防治樟疫霉的方法，所述的代谢物为发酵滤液、发酵滤液提取物或氨气。
[0009]所述的发酵滤液的制备方法为：将菌株ST
‑
TJ4单菌落接种在20mL KB液体培养基中过夜生长，然后将过夜培养物按5％的比例重新接种到50mL新鲜KB液体培养基中，并在28℃下以200rpm振荡培养3天；发酵液在4℃、8000rpm离心15min，上清液用0.22μm微孔滤膜进行过滤。
[0010]所述的发酵滤液提取物为采用有机溶剂萃取法分离纯化获得。
[0011]所述的有机溶剂萃取方法为：将有机溶剂与发酵滤液以1∶1的体积比例加入发酵滤液中，然后剧烈振荡几分钟后收集有机相；将水相加入等体积有机溶剂重新萃取，该过程重复3次；收集所有有机相并使用旋转蒸发器蒸发至干以产生粗提物；粗提物完全溶解在1mL甲醇中并通过0.22μm滤膜过滤后用无菌水稀释备用。
[0012]所述的有机溶剂选自三氯甲烷。
[0013]一种防治樟疫霉的方法，利用Phenazine
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carboxylic acid、2
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Hydroxyphenazine和氨气拮抗樟疫霉。
[0014]一株防治樟疫霉的桔黄假单胞菌，其分类命名为桔黄假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)ST
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TJ4，保存在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2020年8月19号，保藏编号CCTCC NO：M2020435，保藏地址为中国武汉武汉大学。
[0015]所述的桔黄假单胞菌ST
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TJ4在防治樟疫霉中的应用。
[0016]有益效果：与现有技术相比，本申请采用不同拮抗方式、观察菌体形态、研究代谢产物和确定拮抗物质等方法来明确桔黄假单胞菌ST
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TJ4对樟疫霉的拮抗机制；结果表明，桔黄假单胞菌ST
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TJ4能够明显抑制樟疫霉菌丝的生长，导致菌丝畸形，破坏内部细胞结构。此外，菌株ST
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TJ4还能够破坏菌丝细胞膜通透性，影响细胞内容物的合成。超高效液相色谱
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质谱(UPLC
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MS)和气相色谱
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质谱(GC
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MS)分析发现，吩嗪类化合物和2
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Undecanone是主要的抑菌化合物。并且ST
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TJ4菌株产生的挥发性氨也是抑制病原体生长的原因之一。可见，桔黄假单胞菌ST
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TJ4可通过多重机制抑制樟疫霉，具有作为生物防治樟疫霉引起的各种植物病害的潜力。
附图说明
[0017]图1是菌株ST
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TJ4形态学鉴定结果图：A：桔黄假单胞菌菌落本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治樟疫霉的方法，其特征在于，利用桔黄假单胞菌ST
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TJ4的代谢物对樟疫霉进行防治。2.根据权利要求1所述的防治樟疫霉的方法，其特征在于，所述的代谢物为发酵滤液、发酵滤液提取物或氨气。3.根据权利要求2所述的防治樟疫霉的方法，其特征在于，所述的发酵滤液的制备方法为：将菌株ST
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TJ4单菌落接种在20mL KB液体培养基中过夜生长，然后将过夜培养物按5％的比例重新接种到50mL新鲜KB液体培养基中，并在28℃下以200rpm振荡培养3天；发酵液在4℃、8000rpm离心15min，上清液用0.22μm微孔滤膜进行过滤。4.根据权利要求2或3所述的防治樟疫霉的方法，其特征在于，所述的发酵滤液提取物为采用有机溶剂萃取法分离纯化获得。5.根据权利要求4所述的防治樟疫霉的方法，其特征在于，所述的有机溶剂萃取方法为：将有机溶剂与发酵滤液以1∶1的体积比例加入发酵滤液中，然后剧烈振荡几分钟后收集有机相；将水相加入等体积有...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴小芹，孔维亮，张瑜，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：