一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用，该植物乳杆菌为AR495菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14004。该植物乳杆菌AR495能够显著降低大鼠关节组织炎症标志物胶原酶MMP

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用


[0001]本专利技术属于微生物
，涉及一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种由关节之间磨损导致的退行性关节疾病，发病部位包括关节滑膜、半月板、关节软骨和软骨下骨。引发OA的原因可能是由机械损伤、氧化损伤、炎症损伤、免疫功能异常等多种机制导致的关节软骨细胞凋亡和胞外基质降解。其主要表现是关节组织代谢异常，促炎性细胞因子和蛋白酶大量分泌，造成软骨细胞外基质被分解，从而引发软骨层退化及滑膜炎症，导致关节功能丧失等。
[0003]炎症因子分泌异常和氧化应激OA造成发生发展的重要生理机制。IL
‑
1β和TNF
‑
α等是骨关节损伤最重要的炎症介质，可以诱导软骨细胞基质金属蛋白酶(MMPs)的合成，改变软骨细胞生存环境，导致软骨细胞凋亡和胞外基质的降解。目前临床上还未找到根治OA的方法，其治疗以改善生活质量为目标，主要采用饮食、药物及手术等方式的组合，以达到镇痛、维持关节功能及缓解临床症状，非必要不进行外科关节置换。鉴于此，近年来许多研究开始研究其他有效、安全及创新的方式来补充OA的治疗方式。益生菌作为一类对宿主有益的活性微生物，具有良好的抗炎、抗氧化等益生功能。开发一种能够有效改善骨关节炎损伤的益生菌，安全有效的缓解骨关节炎，降低治疗的副作用，具有非常重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的就是为了提供一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用，所提供的植物乳杆菌AR495可以有效缓解骨关节炎症损伤。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0006]一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用，该植物乳杆菌为AR495菌株，已在2017年3月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14004。
[0007]进一步的，所述药剂包括AR495菌株，以及药学上可接受的载体。
[0008]进一步的，所述药剂为发酵食品。
[0009]更进一步的，所述发酵食品为AR495菌悬液。
[0010]更进一步优选的，所述AR495菌悬液由生理盐水、以及重悬于生理盐水中的AR495菌株组成。
[0011]更优选的，所述的生理盐水的质量浓度为0.8％～1.0％。
[0012]更优选的，AR495菌株的含量为0.5
×
109～1.5
×
109CFU/ml，具体可为1
×
109CFU/ml。
[0013]本专利技术提供的植物乳杆菌AR495对OA大鼠关节软骨损伤和滑膜炎症有较好的改善
效果，可以有效改善OA炎症标志物胶原酶MMP
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13、胶原降解物CTX
‑
II水平，降低促炎因子TNF
‑
α水平，并且缓解关节面骨组织的骨质流失。综上所述，本专利技术提供的植物乳杆菌AR495可以有效缓解骨关节炎症损伤。
附图说明
[0014]图1为骨关节炎动物实验流程图，其中，Control：对照组大鼠(假手术组)；Treated+0.9％NaCl：骨关节炎模型组；Treated+AR495：骨关节炎模型+AR495治疗；
[0015]图2为大鼠血清胶原酶MMP
‑
13、软骨基质降解物CTX
‑
II及炎症因子TNF
‑
α含量；
[0016]图3为大鼠膝关节组织病理切片中胶原酶MMP
‑
13免疫荧光染色图；红色箭头所指的绿色荧光为MMP
‑
13。
[0017]图4为大鼠膝关节组织番红固绿染色图；分别为放大5倍(5X)与10倍(10X)；黑色箭头所指空白区域为关节滑膜丢失。
[0018]图5为本专利技术的实施例5中大鼠膝关节组织HE染色示意图；分别为放大5倍(5X)与10倍(10X)；黑色箭头所指深色密级区域为炎症聚集。
[0019]图6为大鼠关节面Micro
‑
CT显微成像图，黑色箭头所指为关节面骨质流失区域。
具体实施方式
[0020]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。本实施例以本专利技术技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。
[0021]以下实施例中所涉及的主要试剂如水合氯醛(TCA)和4％多聚甲醛购自国药集团化学试剂公司；大鼠血清胶原酶MMP
‑
13、软骨基质降解物CTX
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II及炎症因子TNF
‑
α的ELISA试剂盒购自上海通蔚生物科技有限公司；重组单克隆抗体Anti
‑
MMP13以及FITC标记的荧光二抗、DAPI染液、免疫荧光封闭液、抗荧光淬灭封片液均购自碧云天生物技术公司；苏木精伊红染色液和骨组织番红固绿染色液购自武汉谷歌生物科技有限公司。
[0022]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明均可从商业途径得到。
[0023]实施例1：大鼠骨关节炎模型(OA)建立和实验分组
[0024]实验选用雄性Wistar大鼠(180g左右，约5
‑
6周)，适应环境1周，不进行任何处置。1周后称重随机分为3组，分别为对照组(Control)、模型组(Treated+0.9％NaCl(w/v，即质量体积比，下同))和益生菌干预组(Treated+AR495)，每组8只。实验前24小时禁食，不禁水，腹腔注射10％水合氯醛(300mg/kg)。对于模型组大鼠的处理是选取大鼠右膝关节，用刀沿髌韧带内侧缘切开皮肤，切口大约1
‑
2cm。切开关节囊，将髌骨向外侧脱位，用11号手术刀将内侧副韧带切断，用5
‑
0可吸收线单独缝合关节囊，再以5
‑
0丝线间断缝合皮肤。正常组进行假手术造模，以同样的方法打开关节囊，但不进行内侧副韧带切断，用生理盐水清洗伤口后关闭关节囊，缝合手术切口。术后分笼饲养，让其自由活动及进食。
[0025]图1是本专利技术的实施例1中动物实验设计示意图。待上述造模后大鼠自然恢复一周后开始进行实验，对照组(Control)在假手术一周后，每只大鼠每天给予500μl生理盐水灌胃，连续灌胃六周。模型组(Treated+0.9％NaCl组)在造模一周后灌胃生理盐水，每只大鼠
每天给予500μl生理盐水灌胃，灌胃六周。益生菌干预组(Treated+AR495)在造模一周后，每只大鼠每天给予500μl AR495菌悬液(1
×
109CFU/ml，重悬于0.9％生理盐水中)灌胃，连续灌胃六周。
[0026]实施例2：植本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌在制备对骨性关节炎具有保护作用的药剂中的应用，该植物乳杆菌为AR495菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14004。2.根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌的应用，其特征在于，所述药剂包括AR495菌株，以及药学上可接受的载体。3.根据权利要求1或2所述的一种植物乳杆菌的应用，其特征在于，所述药剂为发酵食品。4.根据权利要求3所述的一种植物乳杆菌的应用，其特征在于，所述发酵食品为AR495菌悬液。5.根据权利要求4所述的一种植物乳杆菌的应用，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾连中，夏永军，王光强，宋馨，熊智强，杨昳津，张汇，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：