宿主昆虫细胞DNA残留含量定量检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种定量检测宿主细胞DNA残留量的引物、探针序列，及检测方法。该方法可应用于rAAV载体制品成品中，检测Sf9细胞DNA残余含量，也可应用于其他生物制品中Sf9或其他宿主细胞基因组DNA残留量检测。此外，本发明专利技术也可应用于其他SF9细胞表达的重组蛋白制品中宿主细胞残余DNA的检测。细胞残余DNA的检测。

【技术实现步骤摘要】
宿主昆虫细胞DNA残留含量定量检测方法及试剂盒

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[0001]本专利技术涉及生物制品质量控制中残留杂质检测领域，具体涉及一种定量检测在昆虫细胞中生产的生物制品(例如rAAV载体制品或蛋白制品)中宿主昆虫细胞的DNA残留含量的检测方法和相应引物及探针、试剂盒，及其在生物制品质量控制中的应用。

技术介绍
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[0002]重组生物制品不可避免地被来自用于制备该蛋白的细胞的基因组DNA污染。近年来，生物制品的治疗用途得到了较快的发展，基因治疗相关的载体也受到广泛关注。例如，与其他病毒载体相比，由AAV(腺相关病毒，adeno
‑
associated virus)改造而来的重组AAV(rAAV)载体以其低致病性，低免疫原性，宿主范围广泛且稳定表达等独特优势脱颖而出，成为最有前景的病毒载体，并广泛应用于临床研究。目前，在rAAV载体的生产方式中，杆状病毒昆虫表达系统由于具有生物安全性好，感染效率高，生产工艺便于放大等优点，得到了广泛的应用。该系统利用杆状病毒携带AAV包装所需的顺式和反式作用元件，通过感染昆虫细胞Sf9(Spodoptera本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物对，其特征在于，选自以下引物对之中任一对：(1)正向引物：5
’‑
ACGTCCCTGCCCTTTGTA
‑3’
(SEQ ID NO:1)，和反向引物：5
’‑
GGTCCGAAGACCTCACTAAATC
‑3’
(SEQ ID NO:2)；(2)正向引物：5
’‑
ATAAGCTCGCGTTGATTA
‑3’
(SEQ ID NO:4)，和反向引物：5
’‑
TAAATCATTCAATCGGTA
‑3’
(SEQ ID NO:5)；(3)正向引物：5
’‑
ACTACCGATTGAATGATT
‑3’
(SEQ ID NO:7)，和反向引物：5
’‑
TGAACGTCGGAAGAGCGC
‑3’
(SEQ ID NO:8)。2.根据权利要求1所述的引物对进一步与寡核苷酸探针的组合，其特征在于，选自以下三种组合之中任一种：(1)正向引物：5
’‑
ACGTCCCTGCCCTTTGTA
‑3’
(SEQ ID NO:1)，反向引物：5
’‑
GGTCCGAAGACCTCACTAAATC
‑3’
(SEQ ID NO:2)，和探针：5
’‑
ACACCGCCCGTCGCTACTACCG
‑3’
(SEQ ID NO:3)；(2)正向引物：5
’‑
ATAAGCTCGCGTTGATTA
‑3’
(SEQ ID NO:4)，和反向引物：5
’‑
TAAATCATTCAATCGGTA
‑3’
(SEQ ID NO:5)，和探针：5
’‑
CGTCCCTGCCCTTTGTACACAC
‑3’
(SEQ ID NO:6)；(3)正向引物：5
’‑
ACTACCGATTGAATGATT
‑3’
(SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：余双庆，牛苗，戴阳光，董哲岳，李秀，董小岩，吴小兵，
申请(专利权)人：北京五加和基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：