一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法技术

本发明专利技术公开了一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，包括以下步骤：S1：先通过消毒水对成熟的玉米种子进行浸泡消毒，并用蒸馏水冲洗干净，风干处理；S2：将玉米种子的幼胚在预培养基中进行预培养，得到预培养后的成熟胚；S3：采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至成熟胚中；S4：将成熟胚放置成熟培养基中进行培养得到幼苗，本发明专利技术采用成熟的玉米种子作为材料，不仅便于寻找材料同时成本低便于操作，同时利用基因枪轰击法探索玉米的高效遗传转化技术，提供了一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，该方法为玉米的遗传转化提供一个新的技术平台，在玉米遗传转化的研究方面具有重要的作用及广阔的应用前景。究方面具有重要的作用及广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法


[0001]本专利技术涉及植物转基因
，具体是一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法。

技术介绍

[0002]玉米是禾本科的一年生草本植物。又名苞谷、苞米棒子、玉蜀黍、珍珠米等。原产于中美洲和南美洲，它是世界重要的粮食作物，广泛分布于美国、中国、巴西和其他国家。据农业部统计，2017/2018年度我国玉米供需缺口430万吨，根据玉米行业发展趋势报告分析，在2016
‑
2030年期间中国玉米产量的增长速度会有所下降，而玉米总消费量的增长速度将会明显超出产量的增长速度，国内供需缺口将会进一步扩大。若在不扩大种植面积的情况下，应对玉米的需求趋势而言，玉米生产方式方法则需不断优化升级。随分子育种技术的发展，借助分子辅助育种、转基因技术、基因编辑技术等现代育种技术与传统育种技术的综合应用，可对抗除草剂、抗虫、抗病、品质、产量等农艺性状的改良提供有力的助推。
[0003]目前应用最普遍的植物基因的遗传转化方法主要有农杆菌介导法和基因枪法。农杆菌介导转化存在诸多难题，不仅转化周期长且转化率低；而基因枪转化法是借助高速运动的金属微粒使附着于其表面的核酸分子穿过受体的细胞壁，释放出的DNA分子随机整合到基因组中，通过细胞和组织培养再生植株。基因枪法受体类型广泛；操作简便快速；一次处理可使许多细胞转化。
[0004]针对上述问题，现在设计一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，包括以下步骤：
[0008]S1：先通过消毒水对成熟的玉米种子进行浸泡消毒，并用蒸馏水冲洗干净，风干处理；
[0009]S2：将玉米种子的幼胚在预培养基中进行预培养，得到预培养后的成熟胚；
[0010]S3：采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至成熟胚中；
[0011]S4：将成熟胚放置成熟培养基中进行培养得到幼苗。
[0012]作为本专利技术再进一步的方案：所述S1中的消毒水内含有6％浓度的NaClO和2％浓度的NaCl，所述玉米种子需要在消毒水中浸泡25分钟。
[0013]作为本专利技术再进一步的方案：所述S2中的预培养基由溶质和溶剂组成，溶质及其在预培养基中的浓度为0.6mg/IBA，1.7g/LKNO3，0.22g/LKH2PO4，0.003g/LH3BO3和25g/L蔗糖，溶剂为水。
[0014]作为本专利技术再进一步的方案：所述S2中幼胚的预培养需要在25℃的黑暗环境下培
养5天。
[0015]作为本专利技术再进一步的方案：所述S3中基因枪轰击的参数设置为，DNA浓度：2
‑
4μg/μl；轰击次数：1
‑
3次；目标距离：2
‑
5cm；轰击压力：1050
‑
1400psi；真空度：25
‑
30mmH。
[0016]作为本专利技术再进一步的方案：所述S4中的成熟培养基中包括4mg
·
L
‑
12,4
‑
D、0.1mg
·
L
‑
1KT，0.4mg
·
L
‑
1IBA/MS，50μL2.5mol/LCaCl2，0.0425g/L
‑
NA2EDTA
·
2H2O，0.00031g/L
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Na2MoO4
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2H2O和0.013g/L
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MnSO4
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4H2O。
[0017]作为本专利技术再进一步的方案：所述S4中成熟胚需要在24℃
‑
26℃的黑暗环境下培养15
‑
20天。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0019]本专利技术采用成熟的玉米种子作为材料，不仅便于寻找材料同时成本低便于操作，同时利用基因枪轰击法探索玉米的高效遗传转化技术，提供了一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，该方法为玉米的遗传转化提供一个新的技术平台，在玉米遗传转化的研究方面具有重要的作用及广阔的应用前景。
具体实施方式
[0020]本专利技术实施例中，一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，包括以下步骤：
[0021]S1：先通过消毒水对成熟的玉米种子进行浸泡消毒，并用蒸馏水冲洗干净，风干处理，并将幼胚剥离出，所述S1中的消毒水内含有6％浓度的NaClO和2％浓度的NaCl，所述玉米种子需要在消毒水中浸泡25分钟，然后再用蒸馏水浸泡20分钟，然后用含有6％浓度的NaClO和2％浓度的NaCl的消毒水冲洗三遍，最后用蒸馏水冲洗五遍，这样可以对玉米种子上残留的化学物质或细菌等消除，防止化学物品和细菌等影响该实验的实验效果；
[0022]S2：将玉米种子的幼胚在预培养基中进行预培养，得到预培养后的成熟胚，所述S2中的预培养基由溶质和溶剂组成，溶质及其在预培养基中的浓度为0.6mg/IBA，1.7g/LKNO3，0.22g/LKH2PO4，0.003g/LH3BO3和25g/L蔗糖，溶剂为水，这样可以使幼胚吸收的营养更加快速充分，以加快幼胚的成熟效率，从而加快该实验的实验速度，所述S2中幼胚的预培养需要在25℃的黑暗环境下培养5天，这样使幼胚处于黑暗中可以防止幼胚受到阳光的直射造成损坏，以保证幼胚的生长环境；
[0023]S3：采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至成熟胚中，所述S3中基因枪轰击的参数设置为，DNA浓度：2
‑
4μg/μl；轰击次数：1
‑
3次；目标距离：2
‑
5cm；轰击压力：1050
‑
1400psi；真空度：25
‑
30mmH；S3中基因枪轰击的具体参数为，DNA浓度：3μg/μl；轰击次数：2次；目标距离：3cm；轰击压力：1200psi；真空度：26mmH，这样就可以得到枪击后的幼胚，基因枪轰击后，超净工作台上，将基因枪轰击后的玉米成熟胚在25℃，黑暗条件下培养14h；
[0024]S4：将成熟胚放置成熟培养基中进行培养得到幼苗，所述S4中的成熟培养基中包括4mg
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L
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12,4
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D、0.1mg
·
L
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1KT，0.4mg
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L
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1IBA/MS，50μL2.5mol/LCaCl2，0.0425g/L
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NA2EDTA
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2H2O，0.00031g/L
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Na2MoO4
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：先通过消毒水对成熟的玉米种子进行浸泡消毒，并用蒸馏水冲洗干净，风干处理；S2：将玉米种子的幼胚在预培养基中进行预培养，得到预培养后的成熟胚；S3：采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至成熟胚中；S4：将成熟胚放置成熟培养基中进行培养得到幼苗。2.根据权利要求1所述的一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，其特征在于：所述S1中的消毒水内含有6％浓度的NaClO和2％浓度的NaCl，所述玉米种子需要在消毒水中浸泡25分钟。3.根据权利要求1所述的一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，其特征在于：所述S2中的预培养基由溶质和溶剂组成，溶质及其在预培养基中的浓度为0.6mg/IBA，1.7g/LKNO3，0.22g/LKH2PO4，0.003g/LH3BO3和25g/L蔗糖，溶剂为水。4.根据权利要求1所述的一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，其特征在于：所述S2中幼胚的预培养需要在25℃的黑暗环境下培养5天。5.根据权利要求1所述的一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法，其特征在于：所述S3中基因枪轰击的参数设置为，DNA浓度：2
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4μg/μl；轰击次数：1
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：邢少辰，王云鹏，韦正乙，蔡玉红，范杰英，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：