一种简易快速克隆植物基因的原位PCR技术制造技术

本发明专利技术的目的是提供一种基于原位PCR技术简便、快捷克隆植物基因的方法。本发明专利技术基于原位PCR技术，采用碱溶液与表面活性剂混合作为裂解液，比较了两种碱溶液和三种表面活性剂的裂解效果，从中选出了一种最佳的裂解液条件。相比传统PCR技术通过CTAB法和SDS法的繁琐步骤去除细胞内蛋白、多糖、RNA、盐类等杂质，提纯DNA或RNA进行扩增，程序复杂、耗时长，每次提取DNA时都需要大量实验材料与接触有害试剂，无法减少耗材与人力资源，且在提取过程中会造成DNA的损伤。本研究所用的方法无需提DNA或RNA，使用少量烟草叶片与常见实验试剂，即可短时高效裂解烟草叶片内表面细胞壁，使DNA分子裸露，为分子生物学提供了简便、快捷的提取方法，更为经济、高效。高效。

【技术实现步骤摘要】
一种简易快速克隆植物基因的原位PCR技术


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种简易快速克隆植物基因的原位PCR技术。

技术介绍

[0002]原位PCR技术是指结合了传统PCR技术和原位杂交技术的原位多聚酶链式反应技术，兼有二者的优点，该实验技术可以在保持组织细胞形态结构的基础上，增加细胞膜的通透性，以细胞膜作为反应场所，通过前处理使得PCR体系中的引物、探针、酶系、游离核苷酸等进入核膜，与暴露的拟扩增目的DNA或RNA进行PCR反应，且具有较高的敏感性，可以检测出组织或细胞内的微量DNA或RNA并进行大量扩增，又可揭示出扩增的目的片段与目的组织之间的形态结构关系，具有良好的组织定位的能力。
[0003]随着原位PCR技术的广泛运用，该实验技术也在动植物方面受到人们的重视与不断完善，与此同时研究方法有着相应的提高，不同的反应条件也会影响该实验技术的成败，应根据不同的实验材料、不同类型的标本等各种因素，优化出适宜的原位PCR的实验体系，才能获得理想的结果。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解液表面活性剂，Triton X
‑
100，其特征在于是一种比较温和的去垢剂，用作裂解液时可以提高真核细胞细胞膜的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴疆，周灵美，谢晓东，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：