本发明专利技术公开了粉唑醇半抗原、抗原、抗体、检测装置及其制备和应用，涉及粉唑醇半抗原、粉唑醇抗原、粉唑醇抗体和粉唑醇胶体金层析检测装置及其制备和检测粉唑醇的应用。本发明专利技术应用免疫学检测方法，对样品中残留的粉唑醇进行专属检测，具有特异性好、灵敏度高、操作简便、可实现现场快速检测等优点，能更好的满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要，为相关执法部门快速检测蔬菜、水果中是否残留粉唑醇提供技术支持。技术支持。技术支持。
【技术实现步骤摘要】
粉唑醇半抗原、抗原、抗体、检测装置及其制备和应用
[0001]本专利技术涉及食品安全的免疫学检测
，更具体地，本专利技术涉及粉唑醇半抗原、抗原、抗体、检测装置及其制备和应用，其检测装置特别适用于蔬菜、水果中粉唑醇残留的快速检测。
技术介绍
[0002]作为一种低毒、高效杀虫剂，粉唑醇应用广泛，可有效防治粮、棉、果、蔬等作物上的多种害虫。粉唑醇虽然属于低毒杀虫剂，但是使用不当也会造成作物中残留量过高，从而对人体健康造成危害。研究证实，粉唑醇在单一高剂量口服情况下，可导致人体出现痉挛、颤抖和动作不协调等诸多症状。
[0003]国内外已报道了粉唑醇在水稻、甘蓝、豇豆和棉花等作物上的残留分析和安全性评价研究，前处理大多采用丙酮、甲醇、石油醚等试剂提取，液液萃取或固相萃取柱净化，相对来说前处理比较繁琐，主要由气相色谱仪（ECD检测器）或液相色谱仪（PDA检测器）进行检测，但过程较复杂，成本较高，很难达到快速检测的目的，不适用于现场快速检测，不能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供了粉唑醇半抗原、抗原、抗体、检测装置及其制备和应用。
[0005]根据本专利技术的一个方面，提供了粉唑醇半抗原，其结构如下所示：（Ⅰ）。
[0006]根据本专利技术的另一个方面，制备粉唑醇半抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 二甲硫醚、浓硫酸、甲醇反应后，得到第一反应液；S2. 向第一反应液中加入2，4
‑
二氟苯酮、叔丁醇、氢氧化钾颗粒，反应，得到第二反应液，对第二反应液进行萃取，洗涤，干燥，过滤后将滤液减压浓缩，得到第一中间体，第一中间体的结构式如式（Ⅱ）所示：（Ⅱ）；S3. 用DMF溶解三氮唑甲酸甲酯，加入60%钠氢，滴入第一中间体的DMF溶液，反应
后，浓缩蒸干，加入纯化水萃取，洗涤，浓缩，过柱纯化，得到第二中间体，第二中间体的结构式如式（Ⅲ）所示：（Ⅲ）；S4. 加入第二中间体、氢氧化钠、甲醇水溶液，反应后蒸干甲醇，保留水层，调节pH到4~5，萃取，合并有机相，洗涤，干燥，过滤、减压蒸干，得到粉唑醇半抗原，其结构如式（Ⅰ）所示，甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为2:1。
[0007]在一些实施方式中，步骤S1中二甲硫醚与浓硫酸、甲醇的摩尔比为1:（0.5
‑
1.5）:（0.2
‑
1），步骤S2中2，4
‑
二氟苯酮与氢氧化钾的摩尔比为1:（5
‑
10）。
[0008]在一些实施方式中，步骤S3中第一中间体与三氮唑甲酸甲酯、60%钠氢的摩尔比为1:（1
‑
3）：（1
‑
3），步骤S4中第二中间体与氢氧化钠的摩尔比为1:（1
‑
3）。
[0009]根据本专利技术的再一个方面，提供了粉唑醇抗原，包含粉唑醇半抗原以及与粉唑醇半抗原偶联的载体蛋白，载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白中的一种。
[0010]根据本专利技术的第四个方面，提供了粉唑醇抗体，是由粉唑醇抗原经动物免疫制备得到，粉唑醇抗体为粉唑醇单克隆抗体。
[0011]根据本专利技术的第五个方面，提供了粉唑醇半抗原、粉唑醇抗原、粉唑醇抗体在粉唑醇的免疫学检测中的应用。
[0012]根据本专利技术的第六个方面，提供了粉唑醇胶体金层析检测装置，检测装置包括试纸条和微孔反应杯，试纸条包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫和底板，反应膜设有检测线和质控线，检测线包被有粉唑醇抗原，质控线包被有羊抗鼠抗体，微孔反应杯中含有胶体金标记的粉唑醇抗体。
[0013]根据本专利技术的第七个方面，提供了一种检测样品中粉唑醇残留的方法，该方法为使用粉唑醇胶体金层析检测装置对样品中的粉唑醇进行检测，该方法包括以下步骤：1）样品前处理；2）用粉唑醇胶体金层析检测装置进行检测；3）分析检测结果。
[0014]在一些实施方式中，样品为蔬菜或水果。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术提供的粉唑醇半抗原的制备方法，使用的化学试剂容易得到、操作过程简单、合成步骤简洁有效、反应产率较高、并且检测成本较低。本专利技术利用层析式免疫胶体金原理，通过检测卡中检测线与质控线之间的比色来定性检测样本中是否残留有粉唑醇，应用时不需要使用液相色谱或质谱等大型仪器，达到快速检测的目的。本专利技术应用免疫学检测方法，对样品中残留的粉唑醇进行专属检测，具有特异性好、灵敏度高、操作简便、可实现现场快速检测等优点，能更好的满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要，为相关执法部门快速检测蔬菜或水果中是否残留粉唑醇提供技术支持。
附图说明
[0016]图1为本专利技术的一种实施方案的粉唑醇半抗原的质谱图。
[0017]图2为本专利技术的一种实施方案的粉唑醇半抗原的合成流程图。
[0018]图3为本专利技术的一种实施方案的粉唑醇胶体金层析检测装置的试纸条的结构示意图。
[0019]图4为本专利技术的一种实施方案的粉唑醇胶体金层析检测装置的微孔反应杯的结构示意图。
[0020]图5为本专利技术的一种实施方案的粉唑醇胶体金层析检测装置的结果判定示意图。
[0021]图6为本专利技术的一种实施方案的载体蛋白、粉唑醇半抗原、粉唑醇半抗原
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BSA偶联物、粉唑醇半抗原
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OVA偶联物的吸收曲线图。
具体实施方式
[0022]以下通过具体的实施案例对本专利技术作进一步详细的描述，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定。若无特殊说明，本专利技术的所有原料和试剂均为常规市场可购买的原料、试剂。
[0023]实施例1本实施例中二甲硫醚选择国药集团化学试剂有限公司供应的99%的二甲基硫醚，浓硫酸选择国药集团化学试剂有限公司供应的95%~98%的硫酸，甲醇选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯甲醇，叔丁醇选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯叔丁醇，氢氧化钾选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯氢氧化钾，无水硫酸钠选择国药集团化学试剂有限公司供应的99%的无水硫酸钠，60%钠氢选择国药集团化学试剂有限公司供应的60%的氢化钠，氢氧化钠选择选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯氢氧化钠，以下实施例2
‑
10均采用本实施例1中的试剂。
[0024]实施例2粉唑醇半抗原的合成与鉴定粉唑醇半抗原的制备方法，包括以下步骤：S1.向反应容器中加入二甲硫醚，在5℃条件下，依次缓慢滴入浓硫酸、甲醇，室温反应4.5h后，得到第一反应液，其中二甲硫醚与浓硫酸、甲醇的摩尔比为1:（0.5
‑
1.5）:（0.2
‑
1）；S2.向第一反应液中加入2，4
‑
二氟苯酮，再加入叔丁醇助溶，分批加入氢氧化钾颗粒，2，4
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二氟苯酮与氢氧化钾的摩尔本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.粉唑醇半抗原，其特征在于，其结构如式（Ⅰ）所示：（Ⅰ）。2.制备权利要求1所述的粉唑醇半抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 二甲硫醚、浓硫酸、甲醇反应后，得到第一反应液；S2. 向所述第一反应液中加入2，4
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二氟苯酮、叔丁醇、氢氧化钾颗粒，反应，得到第二反应液，对所述第二反应液进行萃取，洗涤，干燥，过滤后将滤液减压浓缩，得到第一中间体，所述第一中间体的结构式如式（Ⅱ）所示：（Ⅱ）；S3. 用DMF溶解三氮唑甲酸甲酯，加入60%钠氢，滴入所述第一中间体的DMF溶液，反应后，浓缩蒸干，加入纯化水萃取，洗涤，浓缩，过柱纯化，得到第二中间体，所述第二中间体的结构式如式（Ⅲ）所示：（Ⅲ）；S4. 加入所述第二中间体、氢氧化钠、甲醇水溶液，反应后蒸干甲醇，保留水层，调节pH到4~5，萃取，合并有机相，洗涤，干燥，过滤、减压蒸干，得到粉唑醇半抗原，其结构如式（Ⅰ）所示，所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为2:1。3.根据权利要求2所述的制备权利要求1所述的粉唑醇半抗原的方法，其特征在于，所述步骤S1中二甲硫醚与浓硫酸、甲醇的摩尔比为1:（0.5
‑
1.5）:（0.2
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1），所述步骤S2中2，4
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二氟苯酮与氢氧化钾的摩尔比为1:（5
‑
10）。4.根据权利要求2所述的制备权利要求1所述的粉唑醇半抗原的方法，其特征在于，所述步骤S3中...
【专利技术属性】
技术研发人员：王炳志，杨星星，付辉，严义勇，邓启福，杨中，程令，张鑫，王水树，肖昭理，
申请(专利权)人：深圳市易瑞生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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