一种特利加压素杂质Q的制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成技术领域，尤其涉及一种特利加压素杂质Q的制备方法。本发明专利技术首先合成两条稳定性良好的多肽片段一和多肽片段二，然后通过缩合反应多肽片段一C端第4位Cys残基的SH与多肽片段二C端第4位Cys残基的SNpys或SPyr发生二硫键的交换形成第一对二硫键，经碘氧化反应，在脱除Cys的Acm保护基的同时形成第二对二硫键。实验表明，本发明专利技术制备方法获得的特利加压素杂质Q纯度高，杂质少，粗品纯度可达75％以上。75％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种特利加压素杂质Q的制备方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成
，尤其涉及一种特利加压素杂质Q的制备方法。

技术介绍

[0002]特利加压素(Terlipressin)是一种人工合成的垂体后叶分泌激素的类似物，在人体内可被酶水解生成加压素，对平滑肌产生收缩作用，临床上主要用于治疗食管静脉曲张出血。其肽序如下：
[0003][0004]特利加压素在制备和储存的过程会产生杂质Q，从而影响药物的安全性。在开发特利加压素生产工艺的过程，需要制备杂质Q的对照品用于其产品质量的研究。
[0005]杂质Q的肽序如下：
[0006][0007]目前，现有技术中大量的文献报道了特利加压素的制备方法，但没有任何关于制备杂质Q的报道。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术提供了一种特利加压素杂质Q的制备方法。
[0009]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0010]本专利技术提供了一种特利加压素杂质Q的制备方法，包括：
[0011]步骤1：按照C端到N端的顺序，合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端偶联有树脂载体、第4位Cys侧链上偶联有Acm保护基、第9位Cys侧链偶联有Trt或Mmt保护基的肽树脂；
[0012]步骤2：在裂解液1的作用下，将步骤1的肽树脂裂解，获得多肽片段一；
[0013]步骤3：在裂解液2的作用下，将步骤1的肽树脂裂解，获得多肽片段二；
[0014]步骤4：将多肽片段一和多肽片段二混合，依次经缩合反应、碘氧化反应，获得特利加压素杂质Q粗品；
[0015]所述裂解液1包括捕捉剂和TFA；
[0016]所述裂解液2包括捕捉剂、TFA和DTDP的混合物，或捕捉剂、TFA和DTNP的混合物；
[0017]所述裂解液1和裂解液2中，捕捉剂为PhSMe、PhOH、H2O、TIS、PhOMe中的一种或几种。
[0018]本专利技术合成的多肽片段一和多肽片段二具有良好的稳定性，多肽片段一C端第4位Cys残基的SH与多肽片段二C端第4位Cys残基的SNpys或SPyr发生二硫键的交换形成第一对二硫键，经碘氧化反应，在脱除Cys的Acm保护基的同时形成第二对二硫键，氧化效率高，杂质少。
[0019]本专利技术中，所述树脂载体为氨基树脂。一些实施方案中，所述氨基树脂包括Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂、Rink Amide MBHA树脂。所述氨基树脂的替代度优选为0.1～1.0mmol/g。
[0020]一些实施方案中，所述步骤1具体为：
[0021]步骤1
‑
1：将Fmoc
‑
Gly
‑
OH与树脂载体偶联，脱Fmoc保护基，获得Fmoc
‑
Gly
‑
树脂；
[0022]步骤1
‑
2：按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，在Fmoc
‑
Gly
‑
树脂上，从C端到N端依次偶联如下保护氨基酸：Fmoc
‑
L
‑
Lys(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Cys(Trt或Mmt)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Asn(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Gln(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Phe
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Tyr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Cys(Acm)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
Gly
‑
OH和Boc
‑
Gly
‑
OH，获得肽树脂。
[0023]本专利技术，以kaiser法检测判断步骤1中偶联氨基酸的反应是否完全，如树脂无色透明，则表示反应完全；如树脂显色，则表示反应不完全，需要重复上述操作进行二投。此判断标准适用于后续内容中以kaiser法检测判断反应终点。
[0024]一些实施方案中，所述Fmoc保护基的脱除剂为体积比百分比为20％的哌啶溶液。其中，所述哌啶溶液的溶剂为NMP、THF、DCM和DMF中的一种或几种。
[0025]一些实施方案中，所述偶联剂选自以下组合中的任意一种：
[0026]DIC和HOBT的组合，DIC和HOAT的组合，HBTU、HOBT和DIPEA的组合，HATU、HOAT和DIPEA的组合，或PyBOP、HOBT和DIPEA的组合。
[0027]一些实施方案中，所述裂解液1包括TFA和H2O。
[0028]所述裂解液2包括TFA、H2O和DTDP，或TFA、H2O和DTNP。
[0029]一些实施方案中，所述裂解液1和裂解液2中，捕捉剂为H2O。
[0030]所述裂解液1由TFA和H2O组成。一些具体实施例中，裂解液1由体积比为95:5的TFA和H2O组成。
[0031]所述裂解液2由TFA、H2O和DTDP组成，或由TFA、H2O和DTNP组成。一些具体实施例中，裂解液2由体积质量比ml/ml/g为95:5:5的TFA、H2O和DTDP组成，或体积质量比为95:5:5的TFA、H2O和DTNP组成。
[0032]一些实施方案中，所述缩合反应在醋酸溶液和乙腈存在的条件下进行；缩合反应的温度为室温，反应时间为1h。
[0033]本专利技术提供的制备方法中，在获得特利加压素杂质Q粗品之还包括HPLC纯化的步骤。
[0034]所述HPLC纯化的条件为：
[0035]以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.2％醋酸溶液为流动相A相，甲醇为流动相B相，检测波长为280nm，梯度洗脱。
[0036]本专利技术首先合成两条稳定性良好的多肽片段一和多肽片段二，然后通过缩合反应多肽片段一C端第4位Cys残基的SH与多肽片段二C端第4位Cys残基的SNpys或SPyr发生二硫键的交换形成第一对二硫键，经碘氧化反应，在脱除Cys的Acm保护基的同时形成第二对二硫键。实验表明，本专利技术制备方法获得的特利加压素杂质Q纯度高，杂质少，粗品纯度可达75％以上。
附图说明
[0037]图1示本专利技术特利加压素杂质Q的制备工艺流程图；
[0038]图2示多肽片段一的色谱图；
[0039]图3示多肽片段二的色谱图；
[0040]图4特利加压素杂质Q的粗肽的色谱图；
[0041]图5示特利加压素杂质Q的精肽的色谱图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特利加压素杂质Q的制备方法，其特征在于，包括：步骤1：按照C端到N端的顺序，合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端偶联有树脂载体、第4位Cys侧链上偶联有Acm保护基、第9位Cys侧链偶联有Trt或Mmt保护基的肽树脂；步骤2：在裂解液1的作用下，将步骤1的肽树脂裂解，获得多肽片段一；步骤3：在裂解液2的作用下，将步骤1的肽树脂裂解，获得多肽片段二；步骤4：将多肽片段一和多肽片段二混合，依次经缩合反应、碘氧化反应，获得特利加压素杂质Q粗品；所述裂解液1包括捕捉剂和TFA；所述裂解液2包括捕捉剂、TFA和DTDP的混合物，或捕捉剂、TFA和DTNP的混合物；所述裂解液1和裂解液2中，捕捉剂为PhSMe、PhOH、H2O、TIS、PhOMe中的一种或几种。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述树脂载体为Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1为：步骤1
‑
1：固相合成Fmoc
‑
Gly
‑
树脂；步骤1
‑
2：按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，在Fmoc
‑
Gly
‑
树脂上，从C端到N端依次偶联如下保护氨基酸：Fmoc
‑
L
‑
Lys(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Cys(Trt或Mmt)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Asn(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
L
‑
Gln...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪伟，姜绪邦，尹传龙，唐洋明，余品香，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：