一种伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱的建立方法及其同时测定4个成分含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱的建立方法及其同时测定4个成分含量的检测方法，本研究采用高效液相色谱法，在同一色谱条件下，建立了伤科灵喷雾剂的特征图谱，共有18个共有峰，通过特征图谱与对照品图谱的相关性对比，相似度均大于0.877，全面地反应制剂中的整体内在质量；并建立了同时测定苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶4种成分的含量测定方法。经方法学验证，该方法简便可行，同时具备了定性和定量的双重作用，为伤科灵喷雾剂的质量控制和研究奠定了一定基础。的质量控制和研究奠定了一定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱的建立方法及其同时测定4个成分含量的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，涉及一种伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱的建立方法及其同时测定4个成分含量的检测方法。

技术介绍

[0002]伤科灵喷雾剂为贵州省苗药特色产品，由抓地虎、白及、见血飞、马鞭草、仙鹤草、铁筷子、草乌、莪术、山豆根、三棱等10味药组成，具有清热凉血，活血化瘀，消肿止痛的作用，用于软组织损伤、骨伤、Ⅱ度烧烫伤，湿疹、疱疹，临床疗效确切。伤科灵喷雾剂现行法定质量标准收载于《国家药品监督管理局国家药品标准》(WS
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10226(ZD
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0226)
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2002
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2012Z
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20180)
[1]。原标准测定项中仅对苦参碱和氧化苦参碱2个成分进行含量测定研究，其现行标准过于简单，专属性不强，难以全面控制制剂的内在质量，确保其用药安全和有效性。且目前未见文献报道关于伤科灵喷雾剂质量标准的研究，其质量控制研究存在较大的空缺。中药成分复杂，由多味药材组成的成方制剂所含成分则更多，仅通过单一成分的含量测定对中药成方制剂进行质量控制存在较大的缺陷。多成分含量测定能够更好地反应成方制剂的内在质量。中药特征图谱是一种综合的、可量化的质量分析方法，具有整体性和模糊性的特点，能够综合地、特征地体现中药制剂的内在整体质量，在中药质量控制中具有广泛的作用
[2]。
[0003]为了更好地控制伤科灵喷雾剂的制剂质量，专利技术团队经过大量的实验，用 HPLC法建立了伤科灵喷雾剂的特征图谱，并建立了同时测定苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶4个成分含量的质量标准。经方法学验证，该方法简便可行，同时具备了定性和定量的双重作用，为伤科灵喷雾剂的质量控制和研究奠定了一定基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的提供一种伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱的建立方法。
[0005]本专利技术的另一目的提供一种同时测定伤科灵喷雾剂中4个成分含量的检测方法。
[0006]本专利技术所述药物由抓地虎、白及、见血飞、马鞭草、仙鹤草、铁筷子、草乌、莪术、山豆根、三棱组成；其特征在于所述HPLC特征图谱的建立方法包括以下步骤：
[0007](1)精密量取伤科灵喷雾剂，制备得到伤科灵喷雾剂供试品溶液；
[0008](2)分别精密称取苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶，加甲醇制成混合对照品溶液；
[0009](3)分别取缺山豆根药材和缺铁筷子药材的伤科灵喷雾剂，制备各阴性样品溶液；
[0010](4)将伤科灵喷雾剂供试品溶液、混合对照品溶液、阴性样品溶液、采用高效液相色谱仪分析，得到伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱。
[0011]优选的，
[0012]本专利技术所述的供试品溶液的制备方法为:精密量取伤科灵喷雾剂5mL，水浴蒸发除
去溶剂，加1mL氨试液浸润，加三氯甲烷70mL，混匀，称重，超声处理 30min，放置至室温，三氯甲烷补足减失重量，取三氯甲烷层，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0013]优选的，
[0014]本专利技术所述的混合对照品溶液的制备方法为:分别精密称取苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶，加甲醇制成浓度依次为200μg/mL、200μg/mL、 50μg/mL、50μg/mL的混合对照品溶液。
[0015]优选的，
[0016]本专利技术所述高效液相色谱仪分析的色谱条件与系统适应性试验为：色谱柱，色谱柱规格，4.6mm
×
250mm，5μm；流动相，以0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0～10min， 5％B；10～30min，5％
→
25％B；30～33min，25
→
33％B；33～45min，33％B；45～60min， 33％
→
90％B；流速1.0mL
·
min
‑1，检测波长210nm，柱温35℃；进样量10μL。
[0017]本专利技术所得的HPLC特征图谱中包含18个共有峰。
[0018]本专利技术所述的HPLC特征图谱中包含18个共有峰中，经过指认出4个共有峰，分别为：苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶。
[0019]本专利技术所述同时测定伤科灵喷雾剂4个成分含量的检测方法，包括如下步骤：
[0020](1)供试品溶液的制备：精密量取伤科灵喷雾剂5mL，水浴蒸发除去溶剂，加1～3mL氨试液浸润，加三氯甲烷30～70mL，混匀，称重，超声处理20～30min，放置至室温，三氯甲烷补足减失重量，取三氯甲烷层，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.22μm 的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
[0021](2)对照品溶液的制备：分别精密称取苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶，加甲醇制成浓度依次为200μg/mL、200μg/mL、50μg/mL、50μg/mL 的混合对照品溶液；
[0022](3)色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：色谱柱规格： 4.6mm
×
250mm，5μm；流动相：以0.05～0.1％磷酸水溶液或0.2％三乙胺水溶液为流动相A，乙腈或甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0～10min， 5％B；10～30min，5％
→
25％B；30～33min，25
→
33％B；33～45min，33％B；45～60min， 33％
→
90％B；流速0.8～1.2mL
·
min
‑1，检测波长210nm，柱温25～35℃；
[0023](4)测定法：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液10uL注入高效液相色谱仪中测定，采用外标法计算苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶含量。
[0024]优选的，
[0025]本专利技术4个成分含量检测方法所述的供试品溶液的制备方法为:精密量取伤科灵喷雾剂5mL，水浴蒸发除去溶剂，加1mL氨试液浸润，加三氯甲烷70mL，混匀，称重，超声处理30min，放置至室温，三氯甲烷补足减失重量，取三氯甲烷层，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0026]优选的，
[0027]本专利技术4个成分含量检测方法所述的色谱条件与系统适应性试验为:色谱柱：色谱柱规格：4.6mm
×
250mm，5μm；流动相：以0.1％磷酸水溶液为流动
相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0～10min， 5％B；10～30mi本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱的建立方法，所述药物由抓地虎、白及、见血飞、马鞭草、仙鹤草、铁筷子、草乌、莪术、山豆根、三棱组成；其特征在于所述HPLC特征图谱检测方法包括以下步骤：(1)精密量取伤科灵喷雾剂，制备得到伤科灵喷雾剂供试品溶液；(2)分别精密称取苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶，加甲醇制成混合对照品溶液；(3)分别取缺山豆根药材和缺铁筷子药材的伤科灵喷雾剂，制备各阴性样品溶液；(4)将伤科灵喷雾剂供试品溶液、混合对照品溶液、阴性样品溶液、采用高效液相色谱仪分析，得到伤科灵喷雾剂HPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于所述的供试品溶液的制备方法为:精密量取伤科灵喷雾剂5mL，水浴蒸发除去溶剂，加1mL氨试液浸润，加三氯甲烷70mL，混匀，称重，超声处理30min，放置至室温，三氯甲烷补足减失重量，取三氯甲烷层，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。3.根据权利要求1所述的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于所述的混合对照品溶液的制备方法为:分别精密称取苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶，加甲醇制成浓度依次为200μg/mL、200μg/mL、50μg/mL、50μg/mL的混合对照品溶液。4.根据权利要求1所述的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于所述高效液相色谱仪分析的色谱条件与系统适应性试验为：色谱柱，XB
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C18；色谱柱规格，4.6mm
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250mm，5μm；流动相，以0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0～10min，5％B；10～30min，5％
→
25％B；30～33min，25
→
33％B；33～45min，33％B；45～60min，33％
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90％B；流速1.0mL
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‑1，检测波长210nm，柱温35℃；进样量10μL。5.根据权利要求1至4任一项所述的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于所得的HPLC特征图谱中包含18个共有峰。6.根据权利要求5所述的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于所述的HPLC特征图谱中包含18个共有峰中，经过指认出4个共有峰，分别为：苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶。7.一种同时测定伤科灵喷雾剂中4个成分含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：精密量取伤科灵喷雾剂5mL，水浴蒸发除去溶剂，加1～3mL氨试液浸润，加三氯甲烷30～70mL，混匀，称重，超声处...

【专利技术属性】
技术研发人员：何旭洪，朱志军，曾丽，肖婷，沈祥春，陶玲，支苑，
申请(专利权)人：贵州恒霸药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：